2-6-2- مثال هایی از تولید برون سلولی نانوذرات فلزی نقره توسط باکتریها 23

 

2-7- نانوذرات نقره 27

 

2-7-1- سمیت نقره 29

 

2-7-2- خصوصیات، مکانیسم اثر و کاربردهای نانو ذرات نقره 30

 

2-7-2-1- وسایل درون عروقی مصنوعی.. 33

 

2-7-2-2- کاتترهای قرار گرفته شده در عروق مرکزی.. 34

 

2-7-2-3- کاتترهای نوروسرژیکال. 34

 

2-7-2-4- سیمان استخوان. 35

 

2-7-2-5- پوشاننده های زخم. 35

 

2-7-2-6-مهندسی بافت… 37

 

2-7-2-7-درمان سرطان. 37

 

2-7-2-8-تشخیص پروتئین ها 37

 

2-8-پلیمرهای میکروبی.. 38

 

2-8-1-سلولز. 39

 

2-9-تاریخچه سلولز. 40

 

2-10-ویژگی های سلولز. 40

 

2-11-خواص سلولز. 41

 

2-12-تجزیه سلولز. 42

 

2-13-تولیدسلولز. 43

 

2-14-کاربردهای سلولز وانواع مشتقات آن. 45

 

2-14-1-مشتقات سلولز. 46

 

2-14-1-1-نانو بلورهای سلولز. 46

 

2-14-1-1-1-مشتقات Ncc. 47

 

2-14-1-1-2-ویژگی ها، خصوصیات و مزایای Ncc. 47

 

2-14-1-1-3-معایب Ncc. 48

 

2-14-1-2-کمپلکس سنتز سلولز. 48

 

فصل سوم مواد و روش ها 49

 

3-1- مواد و دستگاه ها 50

 

3-1-1- مواد شیمیایی و محیط های کشت… 50

 

2-1-2-دستگاه ها و وسایل.. 52

 

3-2- روش ها و آزمایشات… 53

 

3-2-1- جداسازی سویه های باکتریایی از سرکه و بررسی تولید سلولز توسط آن ها 53

 

3-2-1-1- محیط کشت هیسترین اسکرام. 53

 

3-2-2-انتخاب و شناسایی سویه های باکتریایی.. 54

 

3-2-2-1-بررسی های فنوتایپینگ سویه های باکتریایی.. 54

 

3-2-2-1-1-رنگ آمیزی گرم. 54

 

3-2-2-1-2- روش لام مرطوب… 55

 

3-2-2-1-3-رنگ آمیزی مالاشیت سبز. 55

 

3-2-2-1-4-آزمون کاتالاز. 55

 

3-2-2-1-5- آزمون اکسیداز. 55

 

3-2-2-1-6- آزمون حرکت، ایندول و تولید ( سولفید هیدروژن) (SIM) 56

 

3-2-2-1-7-آزمون ژلاتین.. 56

 

3-2-3-بررسی های ژنوتایپینگ سویه های باکتریایی.. 56

 

3-2-3-1-استخراج DNA از میکروارگانیسم ها 56

 

3-2-3-1-1-تهیه محلول – فنل- کلروفرم- ایزوآمیل الکل.. 56

 

3-2-3-2-نحوه استخراج DNA از میکروارگانیسم ها 57

 

3-2-3-2-1-تهیه ژل آگارز 1%. 58

 

3-2-3-3-پرایمرهای مورد استفاده جهت شناسایی مولکولی باکتری ها 58

 

3-2-3-4-واکنش زنجیره پلیمراز برای باکتری ها 59

 

3-2-3-5-تعیین توالی قطعات حاصل از واکنش زنجیره ای پلیمراز. 60

 

3-2-4-خالص سازی سلولز تولیدی.. 60

 

3-2-4-1- شستشو به وسیله هیدروکسید سدیم. 61

 

3-2-5-تستهای تایید سلولز. 61

 

 

3-2-5-1-هضم آنزیمی.. 61

 

3-2-5-1-1-آزمون مولیش و بندیکت… 61

 

3-2-5-2-میکروسکوپ الکترونی نگاره 62

 

3-2-6- بررسی تولید نانوذرات نقره توسط استوباکترها و گلوکونوباکترها 62

 

3-2-7-تست های تاییدی تولید نانوذرات نقره 62

 

3-2-7-1- اسپکتروفوتومتری.. 62

 

3-2-7-2- پراش اشعه ایکس… 63

 

3-2-7-3- بررسی توسط میکروسکوپ الکترونی گذاره 63

 

3-2-8- انتخاب سویه های مناسب جهت ادامه آزمون ها 63

 

3-2-8-1-تولید نانوذرات نقره درون بستر سلولزی به روش آر-تی.. 63

 

3-2-9-بررسی خواص ضد میکروبی لایه سلولزی حاوی نانوذرات نقره 63

 

3-2-9-1-تهیه محلول استاندارد نیم مک فارلند. 64

 

3-2-10-نگهداری طولانی مدت سویه ها(روش گلیسرول استوک) 64

 

فصل چهارم نتایج و بحث… 65

 

4-1-جداسازی سویه های باکتریایی از سرکه و بررسی تولید سلولز توسط آنها 66

 

4-2-شناسایی سویه های باکتریایی.. 66

 

4-2-1-بررسی های فنوتایپینگ سویه های باکتریایی.. 66

 

4-2-1-1خصوصیات ماکروسکوپی.. 66

 

4-2-1-2- خصوصیات میکروسکوپی.. 67

 

4-2-1-3- لام مرطوب… 67

 

4-2-1-4-رنگ آمیزی مالاشیت سبز. 67

 

4-3- آزمونهای بیوشیمیایی.. 68

 

4-4- بررسی های ژنوتایپینگ سویه های باکتریایی.. 68

 

4-4-1- استخراج DNA.. 68

 

4-4-2- تکثیر توالی 16SrDNA.. 69

 

4-4-3-تعیین توالی قطعات حاصل از واکنش زنجیره پلیمراز. 70

 

4-5-نتایج خالص سازی و شستشو توسط NaOH.. 71

 

4-6-تستهای تاییدی سلولز. 72

 

4-6-1-هضم آنزیمی.. 72

 

4-6-1-1-آزمون مولیش و بندیکت… 72

 

4-6-2-بررسی میکروسکوپ الکترونی نگاره 72

 

4-7-بررسی تولید نانوذرات نقره توسط باکتری ها 73

 

4-8-تست های تاییدی تولید نانوذرات نقره 73

 

4-8-1-بررسی توسط میکروسکوپ الکترونی گذاره 74

 

4-8-2-پراش اشعه ایکس… 74

 

4-8-3- بررسی اسپکتروفتومتری.. 75

 

4-9-تولید نانوذرات نقره در درون بستر سلولزی به روش آر-تی.. 76

 

4-10- بررسی خواص ضد میکروبی لایه سلولزی حاوی نانوذرات نقره 76

 

فصل پنجم نتیجه گیری.. 78

 

منابع و ماخذ. 89

 

چکیده انگلیسی.. Error! Bookmark not defined.

 

چکیده

 

فرایند تولید سرکه به لحاظ فیزیولوژیک نوعی واکنش اکسیداسیون ناقص می باشد. از باکتری های تولید کننده سرکه به دو جنس اصلی استوباکتر و گلوکونوباکتر می توان اشاره نمود. این باکتری ها گرم منفی میله ای شکل و هوازی مطلق هستند. توسط تاژه های پری تریش متحرکند، رنگدانه تولید نمی کنند. کاتالاز مثبت هستند و فعالیت اکسیداتیو شدید دارند. استوباكترزایلینیوس،یکی از باکتریهای مولدسلولزاست. نانو” عبارتی یونانی است که معنای ^9-10 را داشته و یک نانو یک میلیاردیم می باشد. کاربرد این واژه امروزه بیشتر در نانو تکنولوژی یا فناوری نانو است. نانوذرات نقره، یکی از پر کاربرد ترین ذرات در حوزه نانو می باشد و به‌دلیل خواص فیزیکی و شیمیایی ویژه‌، کاربرد فراوان دارد. در این مطالعه، ابتدا 20 سویه از باکتری تولید کننده سلولز از سرکه جداسازی و شناسایی گردید، سپس 5 سویه جهت مطالعات بیشتر انتخاب و DNA آن ها استخراج و واکنش زنجیره پلیمراز( PCR) انجام گردید و نهایتا با استفاده از پرایمر های اختصاصی تعیین توالی شد. بعد از طی مراحل خالص سازی و تایید لایه سلولزی، تولید نانوذرات نقره توسط باکتری های فوق بررسی و سپس این 5 سویه با توانایی تولید نانوذرات نقره و سلولز تایید شد و نهایتا خواص ضد میکروبی آن ها جهت پوشانندگی زخم ها مورد بررسی قرار گرفت.

 

کلمات کلیدی :گلوکونوباکتر،استوباكتر، نانوذرات نقره، سلولز

 

فصل اول

 

مقدمه

 

1-1-مقدمه ای در مورد سرکه و تاریخچه آن

 

قدمت تولید سرکه حاقل به 400 سال قبل از میلاد مسیح می رسد (Deppenmeier, 2002)، و فرایند تولید آن به لحاظ فیزیولوژیک[1]نوعی واکنش اکسیداسیون ناقص می باشد. اولین توصیف درباره تولید سرکه توسط پاستور در سال 1862 انجام گرفت. او دریافت که مادر سرکه توده ای از ارگانیزم های زنده است که عامل اکسیداسیون اتانول به اسید استیک می باشد. باکتری های استوباکتر استی[2] و گلوکونوباکتر سابکسی[3] به ترتیب توسط Beijerink در سال 1898 و De leeuw و Kluyver در سال 1924 توصیف شدند (Moonmangmee, 2000). Asai در سال 1934 و بار دیگر در سال 1968، این باکتری ها را به دو جنس اصلی استوباکتر و گلوکونوباکتر رده بندی کرد (Higgins, 1990). این دو جنس با تغییراتی همچنان بخشی از خانواده استوباکتریاسه را با 12 جنس به خود اختصاص داده اند.