4

1-2) ساقه

1-3) غده

1-4) جوانه

1-5) ریشه

1-6) گل

2- ارقام سیب زمینی

2-1) رقم‌هاى خیلى ‌زودرس و زودرس

2-2) رقم‌هاى متوسط رس یا میان‌رس

2-3) رقم‌هاى دیررس

3- تاریخچه

4- مواد موجود در سیب زمینی

5- مراحل کشت سیب زمینی

5-1) آماده كردن زمین برای كاشت سیبزمینی

5-2) آماده‌کردن غده‌ها براى کاشت سیبزمینی

5-3) کاشتن غده‌ها

5-4) آبیاری سیب زمینی

5-5) كوددهی سیبزمینی

5 -6) وجین كردن و خاك دادن سیبزمینی

5-7) برداشت

6- مراحل پس از برداشت و فرآوری سیب زمینی

7- اهمیت اقتصادی سیبزمینی

8- ویروسهای بیماریزای سیبزمینی

9- ویروس ایكس سیبزمینی Potato virus X

9-1) آرایهبندی

9-2) علائم

9-3) دامنه میزبانی طبیعی ویروس ایكس سیبزمینی

9-4) گونه های میزبانی بكار رفته جهت تشخیص PVX

9-5) انتقال و انتشار ویروس

9-6) پراکنش جغرافیایی

9-7) خصوصیات ژنوم

9-8) خصوصیات پیكره ویروس

9-9) تکثیر ویروس ایکس سیبزمینی در گیاه

9-10) تنوع ژنتیكی ویروس ایكس سیبزمینی

10- روشهای ردیابی ویروس ایكس سیبزمینی

10-1) سرولوژی

10-2) بررسیهای مولكولی واکنش زنجیرهای پلیمراز Polymerase Chain Reaction (PCR)

11- مطالعات انجام شده در ایران

12- هدف از این تحقیق

فصل دوم:مواد و رو شها

1- جمع آوری نمونه از مزارع سیبزمینی

2- آزمون الایزا Enzyme-Linked Immunosorbent Assay- ELISA))

2-1) تهیه بافرها

2-1-1) بافرفسفات پتاسیم(PH, 7.4), (phosphate buffered saline-PBS)

2-1-2) بافر پوششی کربنات سدیم(PH, 9.6) , (Coating buffer)

2-1-3) بافر شستشو (PH,7.4),(Washing buffer)

2-1-4) بافر عصاره گیری (PH,7.4),(Extraction buffer)

2-1-5) بافر ترکیب پادتن-آنزیم (PH,7.4),(Conjugate buffer)

2-1-6) بافر زمینه (سوبسترا)(PH, 9.8),(Substrate buffer)

3- بررسیهای گلخانهای

4- بررسی انتقال

4-1) بررسی انتقال با سس

4-2) انتقال با تماس

5- بررسی خصوصیات مولكولی

5-1) استخراج آر.ان.ای (RNA Extraction)

5-2) واکنش زنجیرهای پلیمراز به روش رونوشت برداری برگردان (RT-PCR)

5-2-1) مرحله رونوشت برداری برگردان (Reverse transcriptase)

5-2-2) مرحله واکنش زنجیره ای پی. سی. آر

5-3) مشاهده محصول واكنش

5-4) خالص سازی قطعات تکثیر شده

5-4-1) جدا کردن قطعه ژل حاوی DNA تکثیر شده

5-4-2) حل کردن قطعه ژل و آزاد شده قطعه DNA

5-4-3)رسوب دادن DNA

5-4-4)شستشوی رسوب با بافر شستشو

5-4-5) حل شدن DNA در آب

5-6) آنالیز تبارازیی

6- خالص سازی ویروس PVX

7- اسپکتروفتومتری و تعیین غلظت ویروس جدا شده در آموده های(پرپارسیون) خالص شده

فصل سوم:نتیجه گیری

1- بررسی علائم آلودگیهای موجود روی سیب زمینی

1-1) علائم آلودگی روی سیب زمینی

1-2) نشانههای آلودگی روی گوجه فرنگی

2- آزمون بیولوژیکی (واکنش گیاهان محک در مقابل عصاره حاوی ویروس ایکس)

2-1) گل تکمهایی Gomphrena globosa L.

2-2) داتوره Datura stramonium

2-3) سلمکChenopodium amaranticolor	59
2-4) توتون Nicotiana glutinosa L	60
2-5) توتون Nicotiana tabacum. cv. White Burley	60
2-6) توتون Nicotiana tabacum. cv. Samsun	61
2-7) گوجه فرنگی Lycopersicum esculentum Mill	61
2-8) لوبیا Phaseolus vulgaris L.cv. Bountiful	61
2-9) باقلا. Vicia faba	61
2-10) ماش. Vicia sativa L.	62
2-11) دامنه میزبانی و علائم	62
3- درجه حرارت غیر فعال شدن (TIP)	63
4- آخرین حد رقت (DEP)	63
5- پایداری ویروس در شرایط آزمایشگاه (LIV)	63
6- مطالعه روش های انتقال	63
6-1) انتقال با سس	63
6-2) انتقال با تماس	63
7- خالص سازی	63
7-1) روشShepard, 1972	63
7-2) روشFribourg,1975	64
7-3) روشMoreira, 1980	65
8- تعیین پراکنش ویروس بر اساس آزمون الایزاELISA	65
9- بررسی خصوصیات مولكولی	72
9-1) نتایج حاصل از استخراج آر.ان.ای كل گیاه (RNA Extraction)	72
9-2) نتایج واکنش رونوشت برداری برگردان زنجیرهای پلیمراز (RT-PCR)	73
10) آنالیز تبازایی	74

فصل چهارم:بحث، نتیجه گیری و پیشنهادات	76
فهرست منابع فارسی	84
فهرست منابع انگلیسی	85
چکیده انگلیسی	96

فهرست جداول
عنوان	صفحه
جدول1-1 اسامی ویروس های سیب زمینی	18
جدول 1-2 مقایسه بین ELISA, PCR, IC-PCR, RT-PCR-ELISA	35
جدول1-3 توالی آغازگرهای استفاده شده برای سنتز cDNA جهت ردیابی ویروس ایكس سیبزمینی	37
جدول2-1 منطقه و تعداد نمونه های جمع آوری شده از مزارع سیب زمینی در همدان	42
جدول2-2 گیاهان میزبانی که برای مایه زنی ویروس ایکس سیب زمینی استفاده شد	45
جدول2-3 آغازگرهای استفاده شده در آزمون RT-PCR	49
جدول2-4 لیست توالی‌های کامل پروتئین پوششی PVX موجود در بانك ژن كه برای مقایسه با جدایه‌های ایرانی مورد استفاده قرار گرفته‌اند	52
جدول3-1درصد نمونه های علائم دار جمع آوری شده از مزارع همدان	57
جدول3-2 علائم ویروس ایکس بروی گیاهان محک	62
جدول 3-3 درصد آلودگی به چهار ویروس PVX، PVY، PVS و PLRV در مناطق بهار، رزن و کبودرآهنگ	65
جدول3-4 درصد آلودگی همزمان در مزارع استان همدان	66

فهرست نمودارها
عنوان	صفحه
نمودار1-1 توزیع میزان تولید سیب زمینی در استانهای كشور	16
نمودار3-1(Shepard, 1972) Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation	64
نمودار3-2(Fribourg,1975) Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation	64
نمودار3-3 Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation(Moreira,1980)	65
نمودار3-4 نمودار 3-4درصد آلودگی در مزارع سیب زمینی منطقه بهار	68
نمودار3-5 درصد آلودگی در مزارع سیب زمینی در منطقه رزن	69
نمودار3-6 درصد آلودگی مزارع سیب زمینی در منطقه کبودر آهنگ	71
نمودار3-7 درصد آلودگی ویروس های سیب زمینی در مزارع سیب زمینی استان همدان	72