1-5-16- كنترل علفهای هرز 13

 

 

1-5-17- عوامل سوء بر گندم. 13

 

 

1-5-18- عملكرد دانه. 14

 

 

1-6- منطقه مورد مطالعه وشرایط آن. 14

 

 

فصل دوم: پیشینه تحقیق

 

 

مقدمه. 17

 

 

2-1- مطالعات درداخل. 17

 

 

2-2- مطالعات در خارج. 20

 

 

فصل سوم : مواد وروش ها

 

 

3-1- روش تحقیق.. 24

 

 

 

 

 

فصل چهارم: نتایج و بحث

 

 

4-1- مقدمه. 32

 

 

4-1-1- روش آبیاری.. 34

 

 

4-1-2- نحوه کشت.. 36

 

 

4-1-3- تراکم کشت.. 37

 

 

4-1-3- رقم مورد استفاده 38

 

 

4-1-4- میزان آبكشی سالانه. 39

 

 

4-2- تحلیل استنباطی داده ها 40

 

 

4-2-1- تخمین توابع شوری و نتایج آن. 40

 

 

4-2-2- تابع تولید گندم. 43

 

 

4-2-3- محاسبه هزینه صریح آبكشی.. 47

 

 

4-2-4- اندازه ی بهینه برداشت در حالت رقابت آزاد. 48

 

 

4-2-5- اندازه ی بهینه ی برداشت در حالت اعمال مدیریت.. 48

 

 

4-2-6- تابع هزینه. 50

 

 

 

4-3-6-1- تابع هزینه ی استخراج آب جهت تولید گندم. 50

 

 

4-3-7- تابع رفاه 52

 

 

4-3-7-2- تأثیر شوری آب زیرزمینی بر رفاه جامعه. 54

 

 

 

 

 

فصل پنجم : نتیجه گیری وبحث

 

 

نتایج. 56

 

 

پیشنهادها 59

 

 

فهرست منابع وماخذ

 

 

منابع فارسی.. 61

 

 

منابع انگلیسی.. 66

 

 

فهرست جدول­ها

 

 

جدول (4-1) اطلاعات روش آبیاری توسط كشاورز 34

 

 

جدول (4-2) اطلاعات بافت خاک.. 35

 

 

جدول (4-3) اطلاعات نحوه کشت.. 36

 

 

جدول (4-4) اطلاعات تراکم کشت………………………………………………………………….. 37

 

 

جدول (4-5) اطلاعات رقم مورداستفاده 38

 

 

جدول (4-6) میزان كل آبكشی سالانه بهره برداران مورد مطالعه برای یك هكتارکشت در سال 91-90 39

 

 

جدول (4-7) نتایج حاصل از تخمین مدل های خطی و خطی- لگاریتمی شوری.. 41

 

 

جدول (4-8) نتایج حاصل از تخمین مدل لگاریتمی شوری.. 42

 

 

جدول (4-9) نتایج حاصل از تخمین تابع تولید گندم شهرستان ارسنجان سال 91-90 45

 

 

جدول (4-10) محاسبه هزینه استخراج هر واحد آب از چاه در سال زراعی 91-90 (ریال) 47

 

 

جدول (4-11) میزان بهره برداری بهینه از منابع آب در حالت اعمال مدیریت، در نرخ های مختلف تنزیل 49

 

 

جدول (4-12) نتایج حاصل از تخمین تابع خطی هزینه ی متغیر گندم (ریال) 50

 

 

جدول (4-13) میزان تغییر رفاه ناشی از افت سطح آب زیرزمینی در منطقه مورد مطالعه سال 91-90 53

 

 

جدول (4-14) میزان تغییر رفاه ناشی از افت سطح آب زیرزمینی به دلیل افزایش هر دسی زیمنس بر متر شوری آب در منطقه مورد مطالعه 91-90. 54

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

 

نمودار 4-1 توزیع درصد فراوانی روش آبیاری.. 34

 

 

نمودار 4-2 توزیع درصد فراوانی بافت خاک.. 35

 

 

نمودار 4-3 توزیع درصد فراوانی نحوه کشت.. 36

 

 

نمودار 4-4 توزیع درصد فراوانی تراکم کشت.. 37

2 -6-2-اقدامات بهداشتی 30

 

 

2 -6-3-کنترل بیولوژیکی 31

 

 

2 -6-4-کنترل شیمیایی 31

 

 

2-6-5-مدیریت تلفیقی 32

 

 

فصل سوم: مواد و روش ها

 

 

3-1 – جمع آوری خاک آلوده 34

 

 

3-2 –استخراج سیست ها به روش فنویک 34

 

 

3-3 – نحوه ی تهیهCone topو شناسایی سیست ها 35

 

 

3-3-1- تهیه گلیسرین ژل 36

 

 

3-4 – تعیین جمعیت تخم و لارو نماتد در خاک 36

 

 

3-5 – تهیه خاک استریل 37

 

 

3-6 – تهیه بذر و آماده سازی برای کاشت 38

 

 

3-7 – تلقیح تخم و لارو 39

 

 

3-8 – بررسی تیمارها 40

 

 

فصل چهارم : نتیجه و بحث

 

 

4-1– تشخیص نماتدسیست طلایی سیب زمینی 40

 

 

4-2– ارزیابی تغییرات فاکتورهای رشدی و نماتدی روی ارقام سیب زمینی مارفونا و سانته 41

 

 

4-2-1-بررسی جدول مقایسه ی میانگین ها ترکیب های تیماری 44

 

 

4-2– 2-جدول مقایسه ی میانگین تیمارها 51

 

 

فصل پنجم: نتیجه گیری

 

 

5-1– نتیجه گیری 71

 

 

5-2– پیشنهادات 74

 

 

منابع 75

 

 

پیوست 83

 

 

چکیده انگلیسی 96

 

 

 

 

 

فهرست جدول ها

 

 

جدول 4-1 مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری 47

 

 

جدول 4-2- مقایسه ی میانگین تیمارها در وزن تر ریشه 52

 

 

جدول 4-3 مقایسه ی میانگین تیمارها در وزن تر غده 53

 

 

جدول 4-4- مقایسه ی میانگین تیمارها در وزن تر اندام هوایی 55

 

 

جدول 4-5- مقایسه ی میانگین تیمارها در تعداد سیست های روی ریشه 56

 

 

جدول 4-6- مقایسه ی میانگین تیمارها در تعداد لاروهای تری 58

 

 

جدول 4-7- مقایسه ی میانگین تیمارها در سیست های فنویک 59

 

 

جدول 4-8- مقایسه ی میانگین تیمارها در تخم و لارو در هر سیست 61

 

 

جدول 4-9- مقایسه ی میانگین تیمارها 61

 

 

جدول 4-10- تجزیه واریانس وزن تر ریشه 63

 

 

 

جدول 4-11- تجزیه واریانس وزن تر غده 64

 

 

جدول 4-12- تجزیه واریانس وزن تر اندام هوایی 65

 

 

جدول 4-13- تجزیه واریانس تعداد سیست های روی ریشه 66

 

 

جدول 4-14- تجزیه واریانس تعدادلاروها در تری 67

 

 

جدول 4-15- تجزیه واریانس تعداد سیست های موجود در فنویک 68

 

 

جدول 4-16- تجزیه واریانس تعداد تخم و لارو موجود در سیست ها 6

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

 

نمودار 4-1 مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری فاکتور وزن تر ریشه 48

 

 

نمودار 4-2- مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری فاکتور وزن تر غده 48

 

 

نمودار 4-3- مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری فاکتور وزن تر اندام هوایی 49

 

 

نمودار 4-4- مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری فاکتورسیست های روی ریشه 49

 

 

نمودار 4-5- مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری فاکتور لاروهای تری 50

 

 

نمودار 4-6- مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری فاکتورسیست های فنویک 50

 

 

نمودار 4-7- مقایسه ی میانگین ترکیب های تیماری فاکتور تخم و لارو در هر سیست 51

 

 

نمودار 4-8- مقایسه ی میانگین تیمار فاکتور وزن تر ریشه 52

 

 

نمودار 4-9- مقایسه ی میانگین تیمار فاکتور وزن تر غده 54

 

 

نمودار 4-10- مقایسه ی میانگین تیمار فاکتور وزن تر اندام هوایی 55

 

 

نمودار 4-11- مقایسه ی میانگین تیمار فاکتور سیست های روی ریشه 57

 

 

نمودار 4-12- مقایسه ی میانگین تیمار فاکتور لاروهای تری 58

 

 

نمودار 4-13- مقایسه ی میانگین تیمار فاکتور سیستهای فنویک 60

 

 

نمودار 4-14- مقایسه ی میانگین تیمار فاکتور تخم و لارو در هر سیست 61

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها

 

 

شکل 3-1 استخراج سیست به روش فنویک 34

 

 

شکل 3-2- سیست 35

 

 

شکل 3-3-Cone top 36

 

 

شکل 3-4- سیست خرد کن 35

 

 

شکل 3-5- سوسپانسیون تخم ولارو 37

 

 

شکل 3-6- دستگاه استریل خاک 38

 

 

شکل 3-7- کاشت 39

 

 

شکل 3-8- تلقیح تخم و لارو به ریشه 40

 

 

شکل 3-9- وضعیت گلدان ها دو ماه پس از تلقیح 41

 

 

شکل 3-10- تری صد گرم از خاک گلدن ها 41

 

 

شکل 3-11- نمونه های فنویک شده 42

 

 

شکل 3-12-لارو سن دوGlobodera rostochiensis 42

 

 

شکل 4-1- نقوش انتهای بدن نماتد ماده بالغGlobodera rostochiensis 44

 

 

 

 

 

چکیده

3-1- مواد وروشها 43

 

 

3-1-1- نمونهبرداری.. 43

 

 

3-1-2- مشخصات گیاهشناسی گونههای مرتعی مطالعه شده. 43

 

 

3-1-2-1- گونه مرتعی خلر(Lathyrus sativa ). 43

 

 

3-1-2-2- گونه مرتعی قدومه(Alyssum inflatum). 44

 

 

3-1-2-3- گونه مرتعی گونه آبدوست (Carex comans (. 44

 

 

3-1-3- تجزیه شیمیایی نمونهها 44

 

 

3-1-4 – دام مورد استفاده و نحوه آمادهسازی دام. 46

 

 

3-1-5- جایگاه حیوانات و مکان انجام آزمایش… 47

 

 

3-1-6- روش کیسه نایلونی.. 48

 

 

3-1-6-1- عملیات انجام شده پس از خروج کیسهها از داخل شکمبه. 49

 

 

3-1-7- روش تولید گاز. 50

 

 

3-1-7-1- مواد و دستگاههای لازم برای انجام آزمون گاز. 51

 

 

3-1-7-2- حیوان دهنده مایع شکمبه و ابزار گرفتن و آمادهسازی مایع شکمبه. 51

 

 

3-1-7-3-آماده سازی دستگاه. 52

 

 

3-1-7-4-آماده سازی خوراک… 53

 

 

3-1-7-5-آمادهسازی محلولها 53

 

 

3-1-7-6- آزمون گاز. 54

 

 

3-1-7-7- محاسبه پارامترهای هضم پذیری.. 55

 

 

3-1-8- روش طیف سنجی مادون قرمزنزدیک انعکاسی(NIRS). 56

 

 

3-1-8-1- تعیین شاخص های کیفیت با طیف سنجی مادون قرمزنزدیک… 56

 

 

3-1-8-2- جست و جوی اتوماتیک فیلترها 56

 

 

3-1-8-3- تعیین معادلة رگرسیونی از فیلترهای انتخاب شده. 57

 

 

3-1-8-4- بررسی صحت معادلات کالیبراسیون(هم سنجی). 57

 

 

3-2- تجزیه و تحلیل آماری داده ها 57

 

 

فصل چهارم : نتایج

 

 

4- 1- نتایج 60

 

 

 

4- 1- 1- نتایج آنالیز شیمیایی و طیف سنجی مادون قرمز (NIR) صفات کیفی در گونههای مطالعه شده. 60

 

 

4-2- نتایج روش تولید گاز 64

 

 

4-2-1- پارامترهای تولید گاز و قابلیت هضم در گونهها 66

 

 

4-3- نتایج روش کیسه نایلونی 67

 

 

4-3-1- ناپدید شدن ماده خشک و پروتئین خام در دو گونه با روش (In-situ). 67

 

 

4-3 -2- ضرایب تجزیهپذیری ماده خشک و پروتئین گونههای مطالعه شده با روش In-situ. 70

 

 

4- 3- 3- تجزیهپذیری مؤثر ماده خشک و پروتئین گونههای مطالعه شده در سرعتهای عبور متفاوت با روش In-situ. 71

 

 

فصل پنجم : بحث

 

 

5- 1- نتایج تجزیه شیمیایی 87

 

 

5-2-آزمایشهای قابلیتهضم 91

 

 

5-3- نتیجه گیری کلی 96

 

 

5-4- پیشنهادات 96

 

 

منابع …………… 97
فهرست جداول

 

 

جدول 4- 1- مقایسه مقادیر ترکیب اجزا گونه های مطالعه شده در روش تجزیه شیمیایی و NIR (براساس ماده خشک) 61

 

 

جدول 4- 2- مقایسه تیتست صفات دو روش تجزیه شیمیایی و NIR (براساس ماده خشک) در کل تیمارهای مطالعه شده 62

 

 

جدول 4- 3- مقادیر گاز تولید شده در زمانهای انکوباسیون گونههای مطالعه شده در روش تولید گاز 65

 

 

جدول 4-4 – مقایسه پارامترهای تولید گاز در گونههای مرتعی ……………………………………………………….. 67

 

 

جدول 4- 5- تجزیهپذیری ماده خشک و پروتئین گونهها در زمانهای انکوباسیون روش کیسه نایلونی Insitu (درصد ماده خشک) …………………………………………………………………………………………………………………………… 68

 

 

جدول 4- 6- مقایسه ضرایب تجزیه‎پذیری ماده خشک و پروتئین گونه‎ها در روش Insitu (درصد ماده خشک) 71

 

 

جدول 4- 7- مقایسه تجزیهپذیری مؤثر ماده خشک و پروتئین گونهها در روش کیسه نایلونی Insitu (درصد ماده خشک) 7

 

 

فهرست اشکال

 

 

شکل 3-1- مراحل فیستوله گذاری……………………………………………………………………………………….. 48

 

 

تصویر 4-1- نمودارمقادیر صفات اندازه‎گیری شده در روش شیمیایی در گونه‎های مطالعه شده…………….. 62

 

 

تصویر4-2– نمودار مقایسه میانگین کل تیمارها برای صفات مشترک در دو روش شیمیایی و

 

 

طیف‎سنجی……………………………………………………………………………………………………………………… 63

 

 

تصویر 4-3- نمودارهای همبستگی روش شیمیایی و طیف‎سنجی در کل تیمارها………………………………. 64

 

 

تصویر 4-4- نمودار روند تولید گاز در زمانهای انکوباسیون در گونه‎های مطالعه شده…………………………. 66

 

 

تصویر 4-5 – روند ناپدید شدن ماده خشک در روش کیسه نایلونی……………………………………………… 69

 

 

تصویر 4-6- روند تجزیه‎پذیری پروتئش کیسه نایلونی………………………………………………………………. 69

 

 

تصویر 4-7- نمودار همبستگی تجزیه ماده خشک و پروتئین میانگین تمام تیمارها در روش کیسه نایلونی

 

 

……………………………………………………………………………………………………………………………………. 70

 

 

تصویر 4-8- نمودار روند تجزیه‎پذیری موثر ماده خشک(a) و پروتئین(b) در سرعتهای عبور متفاوت در روش کیسه نایلونی 73

 

 

تصویر 4-9- نمودار میزان همبستگی بین تجزیه‎پذیری ماده خشک و پروتئین روش کیسه نایلونی با میزان گاز تولید با انکوباسیون یکسان…………………………………………………………………………………………………………………………… 74

 

 

 

 

 

چکیده
این تحقیق به منظور تعیین ارزشغذایی و قابلیت هضم سه گونه مرتعی خلر(Lathyrus sativa )، قدومه(Alyssum inflatum)، گونه (Carex comans)، مخلوط گونههای مذکور و گونه M. sativa با روشهای شیمیایی، طیفسنجی مادون قرمز، تولید گاز وکیسه نایلونی انجام شد.

9

 

 

2-8- خالص سازی DNA ژنومی باکتری Xcc سویه‏ی ………………………..NIGEB.088(A*)31

 

 

2-9- تعیین کمیت و کیفیت DNA استخراج شده……………………………………………….31

 

 

2-10- واکنش زنجیره‏ای پلیمراز با آنزیم‏هایTaq و Pfu دی.ان.آ پلیمراز جهت جداسازی ژن‏های هدف……………………………………………………………………………………………………………………………………..31

 

 

2-11- الکتروفورز محصولات واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………33

 

 

2-12- خالص‏سازی محصول واکنش زنجیره‏ای پلیمراز………………………………………….33

 

 

2-13- جداسازی محصول PCR و یا محصول حاصل از هضم آنزیمی از روی ژل آگارز……………34

 

 

2-14- هضم آنزیمی با آنزیم‏های محدود کننده تیپ …………………………………………..II35

 

 

2-15- الکتروفورز محصولات واکنش‏های هضم آنزیمی…………………………………………39

 

 

2-16- واکنش اتصال………………………………………………………………………….39

 

 

2-17- تکثیر پلاسمید………………………………………………………………………….42

 

 

2-18- اندازه‏گیری دانسیته نوری(OD) باکتری…………………………………………………..42

 

 

2-19- تکنیک Colony-PCR: غربالگری کلونی‏های نوترکیب……………………………………42

 

 

2-20- استخراج پلاسمید در مقیاس کم ……………………………………(Mini-Preparation)43

 

 

2-21- توالی‏یابی………………………………………………………………………………43

 

 

2-22- انتقال پلاسمید‏های نوترکیب pBI-hrpW و pBI-hrpG به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس با‏ استفاده از روش ذوب و انجماد…………………………………………………………………43

 

 

فصل سوم: نتیجه‏گیری و بحث

 

 

3- شناسایی باکتری Xcc (A*)……………………………………………………………………………………………………………………..47

 

 

3-1- شناسایی به کمک تست بیماریزایی بر روی گیاه میزبان C.auratifolia…………………………………47

 

 

3-2- شناسایی به کمک آغازگرهای اختصاصیMS+/MS- و Xac01 / Xac02……………………………….48

 

 

3-3- استخراج DNA ژنومی از باکتری XCC……………………………………………………………………………49

 

 

3-4- تعیین کیفیت و کمیت DNA استخراج شده………………………………………………50

 

 

3-5- تکثیر ژن‏هایhrpW و hrpG با واکنش زنجیره‏ای پلیمراز………………………………….51

 

 

3-5-1- طراحی آغازگرهای مناسب……………………………………………………………51

 

 

3-5-2- بهینه‏سازی شرایط واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………51

 

 

3-5-3- الکتروفورز محصول واکنش زنجیره‏ای پلیمراز………………………………………….53

 

 

3-6- تایید ناقل‏های کلونینگ و بیانی از طریق الگوهای برشی حاصل از هضم توسط آنزیم‏های برشی نوع II…………………………………………………………………………………………………………………………………….54

 

 

3-7- همسانه‏سازی ژن‏هایhrpG و hrpW در ناقل‏های کلونینگ (PGEM7zf(-) , pUC19)………….55

 

 

3-8- تایید همسانه‏سازی ژن‏های هدف در ناقل‏های کلونینگ (pGEM7zf(-))،( pUC19)………………57

 

 

3-8-1- واکنش کلونی PCR کلون‏های گزینش شده……………………………………………57

 

 

3-8-2- تایید همسانه‏سازی ژن‏هایhrpW/G در ناقل‏های کلونینگ با روش هضم آنزیمی…………58

 

 

3-8-3- تایید همسانه‏سازی ژن‏های hrpW/G در ناقل‏های کلونینگ با روش واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………………………………………………………………………………………………59

 

 

3-9- همسانه سازی ژن‏های hrpG/W در ناقل بیانی pBI121………………………………………………………59

 

 

3-10- تایید همسانه سازی ژن‏های hrpG/W در ناقل بیانی pBI121…………………………………………….62

 

 

3-10-1- واکنش کلونی PCR کلون‏های تشکیل شده……………………………………………62

 

 

3-10-2- تایید همسانه‏سازی ژن‏های hrpG/W در ناقل بیانی pBI121 با روش واکنش هضم آنزیمی.63

 

 

3-10-3- تایید همسانه‏سازی ژن‏های hrpW/G در ناقل بیانی pBI121 با روش واکنش زنجیره‏ای پلیمراز……………………………………………………………………………………….64

 

 

3-11- توالی‏یابی……………………………………………………………………………..65

 

 

3-11-1- نتایج توالی‏یابی……………………………………………………………………..66

 

 

3-12- انتقال پلاسمیدهای نوترکیب pBI.hrpG و pBI.hrpW به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس.67

 

 

3-13- تایید انتقال پلاسمیدهای نوترکیب pBI.hrpW/G به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس……..67

 

 

3-13-1- تایید انتقال پلاسمیدهای نوترکیب pBI.hrpW/G با روش کلونی PCR…………………………..67

 

 

فصل چهارم: جمع‏بندی کلی و پیشنهادها

 

 

4- جمع‏بندی کلی نتایج……………………………………………………………………….70

 

 

4-1- پیشنهادها………………………………………………………………………………71

 

 

پیوست

 

 

5- دستورالعمل استخراج و خالص‏سازی DNA ژنومی باکتری xanthomonas citri pv. citri سویه 088(A*) NIGEB-……………………………………………………………………………………………………………………………………84

 

 

5-1- محلول‏های لازم جهت استخراج DNA ژنومی……………………………………………84

 

 

5-1-1- مراحل استخراج DNA ژنومی…………………………………………………………85

 

 

5-1-2- روش اسپکتروفوتومتری………………………………………………………………86

 

 

 

5-1-3- الکتروفورز بر روی ژل آگارز………………………………………………………….87

 

 

6- الکتروفورز با ژل آگارز……………………………………………………………………………………. 88

 

 

6-1- نمای ساده از دستگاه الكتروفورز…………………………………………………………88

 

 

6-2- ژل آگارز……………………………………………………………………………….89

 

 

6-3- اتیدیوم بروماید………………………………………………………………………….89

 

 

6-4- بافر بارگزاری ژل آگارز………………………………………………………………….90

 

 

6-5- طرز تهیه محلول …………………………………………………………….TBE 0.5X91

 

 

6-6- طرز تهیه آگارز 1%……………………………………………………………………………………………..91

 

 

7- دستورالعمل خالص‏سازی فرآورده‏های تکثیر شده و قطعات DNA از روی ژل آگارز…………………92

 

 

7-1- خالص‏سازی فرآورده‏های تکثیر شده با کیت ……………………………………..Bioneer92

 

 

7-2- خالص‏سازی قطعات DNA از ژل آگارز……………………………………………………………………………93

 

 

8- دستورالعمل تهیه باكتری‏های مستعد برای پذیرش DNA خارجی…………………………………….95

 

 

8-1- تهیه سلول‏های مستعد E.coli……………………………………………………………………………95

 

 

8-2- دستورالعمل تراریزش باکتری مستعد به روش شوک حرارتی………………………………………………96

 

 

8-3- تهیه‏ی سلول‏های مستعد و انتقال پلاسمید‏های نوترکیب pBI-hrpW و pBI-hrpG به سویه‏های آگروباکتریوم تومفاسینس با استفاده از روش ذوب و انجماد……………………………………………………….97

 

 

9- استخراج پلاسمید در مقیاس کم از باکتری E.coli سویه DH5α……………………………………………..99

 

 

9-1- استخراج پلاسمید به روش دستی…………………………………………………………99

 

 

9-2- استخراج پلاسمید با استفاده از کیت MBST (دکتر شایان)…………………………………….101

 

 

9-3- روش تهیه محلول های IPTG و …………………………………………………X-Gal103

 

 

9-3-1- تهیه محلول ایزوپروپیل D-B تیوگالاکتوپیرانوزید (IPTG)…………………………………………….103

 

 

9-3-2- تهیه 5 برمو-3 کلرو- اتیدولیل D-B گالاکتوزید (X-Gal)………………………………103

 

 

10- تهیه مایه تلقیح و بهینه‏سازی شرایط مایه‏زنی گیاه میزبان……………………………………………………..103

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

 

1-1- بیماریزایی فرم‏های مختلف شانکر روی چهار گونه از مرکبات…………………………………. 12

 

 

1-2- مشخصات آغازگرهای اختصاصی برای تکثیر و شناسایی…………………………………………. 29

 

 

2-2- برنامه Multipelex PCR با آغازگر‏های MS+/MS- و Xac01/Xac02……………………… 30

 

 

3-2- ترکیب محلول مادری برای واکنش Multipelex PCR جهت شناسایی باکتری……………. 30

 

 

4-2- شیب‏ دمایی به‏کار رفته برای تعیین بهترین دمای اتصال با آنزیم Taq…………………………. 32

 

 

5-2- ترکیب محلول مادری برای واکنش زنجیره‏ای پلیمراز با آنزیم pfu دی.ان.آ پلیمراز………. 32

 

 

6-2- چرخه حرارتی به‏کار ‏رفته برای تکثیر نهایی با آنزیم pfu…………………………………………. 33

 

 

7-2- شرایط واکنش هضم ژن hrpW و ناقل همسانه‏سازی مربوطه (pGEM7zf(-))……………. 36

 

 

8-2- شرایط واکنش هضم ژن hrpG و ناقل همسانه‏سازی مربوطه (pUC19)…………………….. 36

 

 

9-2- شرایط واکنش دوتایی هضم آنزیمی جهت تایید ناقل‏های همسانه‏سازی ((-)pGEM7zf) و (pUC19)…………………………………………………………………………………………………………….. 37

 

 

10-2– شرایط واکنش هضم دوتایی آنزیمی جهت تایید ناقل بیانی(pBI121)…………………….. 37

 

 

11-2- شرایط واکنش هضم آنزیمی ژن hrpW و pBI121 جهت بازیابی قطعات مورد نظر از روی ژل………………………………………………………………………………………………………………………. 38

 

 

12-2– شرایط واکنش هضم ژن hrpG و ناقل بیانی جهت بازیابی قطعات مورد نظر از روی ژل…………………………………………………………………………………………………………………………. 38

 

 

13-2- شرایط واکنش اتصال (pBI121-hrpG)………………………………………………………….. 40

 

 

14-2- شرایط واکنش اتصال (pBI121-hrpW)…………………………………………………………… 40

 

 

15-2- شرایط واکنش اتصال (pUC19-hrpG)……………………………………………………………. 41

 

 

16-2- شرایط واکنش اتصال (pGEM7zf(-)-hrpW)…………………………………………………… 41

 

 

17-2- چرخه حرارتی به‏کار رفته برای واکنش کلونی PCR به منظور تایید همسانه‏سازی در وکتور بیانی…………………………………………………………………………………………………………………….. 45

 

 

18-2- ترکیبات محلول مادری واکنش زنجیره‏ای کلونی PCR جهت تایید عمل همسانه‏سازی دروکتورهای کلونینگ و بیانی…………………………………………………………………………………… 45

 

 

1-5- مواد و مقدار مورد نیاز جهت تهیه بافر Loading dye……………………………………………… 9

 

 

فهرست شکل‏ها

 

 

1-3- تست بیماریزایی روی لیمو………………………………………………………………………………………………48

 

 

2-3- تست (Xaco1 / Xaco2 / MS+/MS) Multiplex PCR……………………………………………………..49

 

 

3-3- اکتروفورزDNA ژنومی استخراج شده بر روی ژل آگارز 1%………………………………………………..50

 

 

4-3- واکنش زنجیره‏ای پلیمراز با Taq دی.ان.آ پلیمراز و گرادیان دمایی جهت بهینه‏سازی بهترین دمای اتصال با پرایمرهای اختصاصی………………………………………………………………………………………………….53

 

 

5-3- واکنش زنجیره‏ای پلیمراز برای تکثیر ژن‏های hrpG , hrpW با آغازگرهای اختصاصی و آنزیم pfu دی.ان.آ پلیمراز………………………………………………………………………………………………………………………..53

 

 

6-3- الکتروفورز محصول هضم آنزیمی ناقل‏های کلونینگ و بیانی با آنزیم‏های برشی نوع II بر روی ژل آگارز 1%………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………15

 

 

1-10-5- تثبیت بوسیله به دام انداختن در یک ژل پلیمری یا کپسول …………………………………………………….15

 

 

1-11- کپسوله کردن آنزیم و روش محصور کردن …………………………………………………………………………………… 16

 

 

1-11-1- مزیت های تثبیت آنزیم در میکروکپسول ها ……………………………………………………………………………..16

 

 

1-11-2- تکنولوژی انکپسوله کردن برای کاربردهای غذایی …………………………………………………………………….17

 

 

1-12- اتلاف فعالیت آنزیم های تثبیت شده و ویژگی های آن ها …………………………………………………………… 18

 

 

1-13- تکنولوژی نوین آنزیم برای کاربردهای غذایی ………………………………………………………………………………….19

 

 

1-14- هیدرولیز لاکتوز و مزایای هیدرولیز لاکتوز شیر ………………………………………………………………………….. 20

 

 

1-15- هیدرولیز لاکتوز آب پنیر ………………………………………………………………………………………………………………..21

 

 

1-16- کاربردهای بالقوه آب پنیر هیدرولیز شده …………………………………………………………………………………….21

 

 

1-18- کاربردهای تثبیت آنزیم لاکتازدر صنعت فرآوری موادغذایی …………………………………………………………21

 

 

1-19- ویژگی های آنزیم لاکتاز حاصل از منابع مختلف …………………………………………………………………………..23

 

 

1-20- فاکتورهای موثر در هزینه فرآیند تثبیت ………………………………………………………………………………………..25

 

 

 

 

 

2- مواد و روش ها ………………………………………………………………………………………………………………………………………26

 

 

 

 

 

2-1- طرح آزمایش و تجزیه و تحلیل آماری …………………………………………………………………………………………….27

 

 

2-2- مواد شیمیایی و تجهیزات مورد استفاده در آزمایش ها ……………………………………………………………………29

 

 

2-3- طراحیبیوراکتورو مشخصات ستون بیوراکتور …………………………………………………………………………….. 31

 

 

2-4-دیاگرام خط تولید شیر کم لاکتوز برای آزمایش ها ……………………………………………………………………………33

 

 

2-5-روش تولید و ساخت شیر کم لاکتوز (غیر مداوم و مداوم ) ……………………………………………………………….34

 

 

2-6- روش اندازه گیری درصد هیدرولیز لاکتوز ………………………………………………………………………………………….35

 

 

2-7- نحوه تثبیت آنزیم در سدیم آلژینات و رخداد های تثبیت آنزیم در آلژینات …………………………………….35

 

 

 

 

 

3- نتیجه گیری ……………………………………………………………………………………………………………………………………………..38

 

 

 

 

 

 

3-1- درصد هیدرولیز لاکتوز شیر…………………………………………………………………………………………………………………39

 

 

3-1-1- آنالیز واریانس مدل ……………………………………………………………………………………………………………………….40

 

 

3-2- اثر دما روی آنزیم لاکتاز ……………………………………………………………………………………………………………………..42

 

 

3-2-1- اثر غلظت آنزیم تثبیت شده …………………………………………………………………………………………………………..44

 

 

3-3- اثر غلظت آلژینات روی کارایی بیوراکتور ………………………………………………………………………………………….45

 

 

3-3-1- اثر فلوریت روی کارایی ستون ………………………………………………………………………………………………………46

 

 

 

 

 

4- بهینه سازی و نتیجه گیری کلی ……………………………………………………………………………………………………………47

 

 

4-1- نتیجه گیری کلی ……………………………………………………………………………………………………………………………….48

 

 

4-2- پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………………………….49

 

 

چکیده انگلیسی …………………………………………………………………………………………………………………………………………….50

 

 

پیوست …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..52

 

 

منابع

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

 

جدول 1-1-منابع مختلف آنزیم لاکتاز و عامل های تثبیت کننده …………………………………………………………..24

 

 

جدول 1-2- هیدرولیز لاکتوز با تکنیک های مختلف تثبیت ……………………………………………………………………..25

 

 

جدول 2- 4 –طراحی آزمایشات ………………………………………………………………………………………………………………… 28

 

 

جدول 2-5 – آنالیز واریانس مدل ………………………………………………………………………………………………………………..40

 

 

جدول 4-1-مقادیر بهینه جهت تولید شیر کم لاکتوز با هدف حداکثر هیدرولیز لاکتوز و کمینه بودن دبی جریان شیر ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………47

 

 

جدول 4-2-مقادیر بهینه جهت تولید شیر کم لاکتوز با هدف حداکثر هیدرولیز لاکتوز و بیشینه بودن دبی جریان شیر……………………………………………………………………………………………………………………………………………………..47

 

 

فهرست اشکال

 

 

شکل 1-1-تصویر سه بعدی آنزیم لاکتاز حاصل از E.Coli …………………………………………………………………………..4

 

 

شکل 1-2- لاکتوز اندازه گیری شده به روش نقطه انجماد وکروماتوگرافی مایع ………………………………………….9

 

 

شکل 1-3-آنزیم بنزآلدئید لیاز به همراه زنجیره اش از طریق حامل اصلاح شده با نیکل تثبیت شده و تشکیل بنزوئین را کاتالیز می کند ………………………………………………………………………………………………………………..14

 

 

شکل 1-4-متراکم شدن و اتصال عرضی آنزیم ها برای ایجاد یک CLA (توده های آنزیمی اتصال عرضی شده ) …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………15

 

 

شکل 2-1- طراحی Packed Bed Bioreactor ……………………………………………………………………………………31

 

 

شکل 2-2 -دیاگرام خط تولید شیر کم لاکتوز ……………………………………………………………………………………………33

 

 

شکل 2-3- نحوه تثبیت آنزیم به روش محصور کردن …………………………………………………………………………………36

 

 

شکل3-1- کانتورپلات نشان دهنده اثر دما و غلضت آنزیم بر درصد هیدرولیز لاکتوز موجود در شیر