4
1-2) ساقه
4
1-3) غده
5
1-4) جوانه
5
1-5) ریشه
5
1-6) گل
5
2- ارقام سیب زمینی
5
2-1) رقمهاى خیلى زودرس و زودرس
5
2-2) رقمهاى متوسط رس یا میانرس
6
2-3) رقمهاى دیررس
6
3- تاریخچه
7
4- مواد موجود در سیب زمینی
8
5- مراحل کشت سیب زمینی
8
5-1) آماده كردن زمین برای كاشت سیبزمینی
8
5-2) آمادهکردن غدهها براى کاشت سیبزمینی
9
5-3) کاشتن غدهها
10
5-4) آبیاری سیب زمینی
11
5-5) كوددهی سیبزمینی
11
5 -6) وجین كردن و خاك دادن سیبزمینی
12
5-7) برداشت
13
6- مراحل پس از برداشت و فرآوری سیب زمینی
14
7- اهمیت اقتصادی سیبزمینی
15
8- ویروسهای بیماریزای سیبزمینی
17
9- ویروس ایكس سیبزمینی Potato virus X
20
9-1) آرایهبندی
20
9-2) علائم
21
9-3) دامنه میزبانی طبیعی ویروس ایكس سیبزمینی
22
9-4) گونه های میزبانی بكار رفته جهت تشخیص PVX
23
9-5) انتقال و انتشار ویروس
23
9-6) پراکنش جغرافیایی
24
9-7) خصوصیات ژنوم
24
9-8) خصوصیات پیكره ویروس
26
9-9) تکثیر ویروس ایکس سیبزمینی در گیاه
27
9-10) تنوع ژنتیكی ویروس ایكس سیبزمینی
28
10- روشهای ردیابی ویروس ایكس سیبزمینی
30
10-1) سرولوژی
30
10-2) بررسیهای مولكولی واکنش زنجیرهای پلیمراز Polymerase Chain Reaction (PCR)
32
11- مطالعات انجام شده در ایران
37
12- هدف از این تحقیق
40
فصل دوم:مواد و رو شها
1- جمع آوری نمونه از مزارع سیبزمینی
42
2- آزمون الایزا Enzyme-Linked Immunosorbent Assay- ELISA))
42
2-1) تهیه بافرها
42
2-1-1) بافرفسفات پتاسیم(PH, 7.4), (phosphate buffered saline-PBS)
43
2-1-2) بافر پوششی کربنات سدیم(PH, 9.6) , (Coating buffer)
43
2-1-3) بافر شستشو (PH,7.4),(Washing buffer)
43
2-1-4) بافر عصاره گیری (PH,7.4),(Extraction buffer)
43
2-1-5) بافر ترکیب پادتن-آنزیم (PH,7.4),(Conjugate buffer)
43
2-1-6) بافر زمینه (سوبسترا)(PH, 9.8),(Substrate buffer)
44
3- بررسیهای گلخانهای
45
4- بررسی انتقال
46
4-1) بررسی انتقال با سس
46
4-2) انتقال با تماس
46
5- بررسی خصوصیات مولكولی
46
5-1) استخراج آر.ان.ای (RNA Extraction)
46
5-2) واکنش زنجیرهای پلیمراز به روش رونوشت برداری برگردان (RT-PCR)
48
5-2-1) مرحله رونوشت برداری برگردان (Reverse transcriptase)
48
5-2-2) مرحله واکنش زنجیره ای پی. سی. آر
48
5-3) مشاهده محصول واكنش
49
5-4) خالص سازی قطعات تکثیر شده
49
5-4-1) جدا کردن قطعه ژل حاوی DNA تکثیر شده
49
5-4-2) حل کردن قطعه ژل و آزاد شده قطعه DNA
49
5-4-3)رسوب دادن DNA
50
5-4-4)شستشوی رسوب با بافر شستشو
50
5-4-5) حل شدن DNA در آب
50
5-6) آنالیز تبارازیی
51
6- خالص سازی ویروس PVX
53
7- اسپکتروفتومتری و تعیین غلظت ویروس جدا شده در آموده های(پرپارسیون) خالص شده
55
فصل سوم:نتیجه گیری
1- بررسی علائم آلودگیهای موجود روی سیب زمینی
56
1-1) علائم آلودگی روی سیب زمینی
56
1-2) نشانههای آلودگی روی گوجه فرنگی
57
2- آزمون بیولوژیکی (واکنش گیاهان محک در مقابل عصاره حاوی ویروس ایکس)
58
2-1) گل تکمهایی Gomphrena globosa L.
58
2-2) داتوره Datura stramonium
59
| 2-3) سلمکChenopodium amaranticolor | 59 |
| 2-4) توتون Nicotiana glutinosa L | 60 |
| 2-5) توتون Nicotiana tabacum. cv. White Burley | 60 |
| 2-6) توتون Nicotiana tabacum. cv. Samsun | 61 |
| 2-7) گوجه فرنگی Lycopersicum esculentum Mill | 61 |
| 2-8) لوبیا Phaseolus vulgaris L.cv. Bountiful | 61 |
| 2-9) باقلا. Vicia faba | 61 |
| 2-10) ماش. Vicia sativa L. | 62 |
| 2-11) دامنه میزبانی و علائم | 62 |
| 3- درجه حرارت غیر فعال شدن (TIP) | 63 |
| 4- آخرین حد رقت (DEP) | 63 |
| 5- پایداری ویروس در شرایط آزمایشگاه (LIV) | 63 |
| 6- مطالعه روش های انتقال | 63 |
| 6-1) انتقال با سس | 63 |
| 6-2) انتقال با تماس | 63 |
| 7- خالص سازی | 63 |
| 7-1) روشShepard, 1972 | 63 |
| 7-2) روشFribourg,1975 | 64 |
| 7-3) روشMoreira, 1980 | 65 |
| 8- تعیین پراکنش ویروس بر اساس آزمون الایزاELISA | 65 |
| 9- بررسی خصوصیات مولكولی | 72 |
| 9-1) نتایج حاصل از استخراج آر.ان.ای كل گیاه (RNA Extraction) | 72 |
| 9-2) نتایج واکنش رونوشت برداری برگردان زنجیرهای پلیمراز (RT-PCR) |
73 |
| 10) آنالیز تبازایی | 74 |
| فصل چهارم:بحث، نتیجه گیری و پیشنهادات | 76 |
| فهرست منابع فارسی | 84 |
| فهرست منابع انگلیسی | 85 |
| چکیده انگلیسی | 96 |
| فهرست جداول | ||
| عنوان | صفحه | |
| جدول1-1 اسامی ویروس های سیب زمینی |
18 |
|
| جدول 1-2 مقایسه بین ELISA, PCR, IC-PCR, RT-PCR-ELISA | 35 | |
| جدول1-3 توالی آغازگرهای استفاده شده برای سنتز cDNA جهت ردیابی ویروس ایكس سیبزمینی | 37 | |
| جدول2-1 منطقه و تعداد نمونه های جمع آوری شده از مزارع سیب زمینی در همدان | 42 | |
| جدول2-2 گیاهان میزبانی که برای مایه زنی ویروس ایکس سیب زمینی استفاده شد | 45 | |
| جدول2-3 آغازگرهای استفاده شده در آزمون RT-PCR | 49 | |
| جدول2-4 لیست توالیهای کامل پروتئین پوششی PVX موجود در بانك ژن كه برای مقایسه با جدایههای ایرانی مورد استفاده قرار گرفتهاند | 52 | |
| جدول3-1درصد نمونه های علائم دار جمع آوری شده از مزارع همدان | 57 | |
| جدول3-2 علائم ویروس ایکس بروی گیاهان محک | 62 | |
| جدول 3-3 درصد آلودگی به چهار ویروس PVX، PVY، PVS و PLRV در مناطق بهار، رزن و کبودرآهنگ | 65 | |
| جدول3-4 درصد آلودگی همزمان در مزارع استان همدان | 66 | |
| فهرست نمودارها | |
| عنوان | صفحه |
| نمودار1-1 توزیع میزان تولید سیب زمینی در استانهای كشور | 16 |
| نمودار3-1(Shepard, 1972) Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation | 64 |
| نمودار3-2(Fribourg,1975) Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation | 64 |
| نمودار3-3 Ultraviolet- absorption spectra PVX preparation(Moreira,1980) | 65 |
| نمودار3-4 نمودار 3-4درصد آلودگی در مزارع سیب زمینی منطقه بهار | 68 |
| نمودار3-5 درصد آلودگی در مزارع سیب زمینی در منطقه رزن | 69 |
| نمودار3-6 درصد آلودگی مزارع سیب زمینی در منطقه کبودر آهنگ | 71 |
| نمودار3-7 درصد آلودگی ویروس های سیب زمینی در مزارع سیب زمینی استان همدان | 72 |
ی نوشتهها
dth="612">
|
[پنجشنبه 1399-10-11] [ 02:03:00 ق.ظ ]
|
