1-4-4- تسهیم……………………………………………………………………………………………………………………………………..12

 

1-5- تولید جنین در شرایط in vitro

 

1-5-1- بلوغ آزمایشگاهی تخمک (IVM)………………………………………………………………………………………….15

 

1-5-2- ظرفیت پذیری اسپرم………………………………………………………………………………………………………………19

 

1-5-3- لقاح در شرایط آزمایشگاهی(IVF)………………………………………………………………………………………..21

 

1-5-4-کشت جنین در شرایط آزمایشگاهی(IVC)……………………………………………………………………………23

 

1-6- مقایسه جنین­های طبیعی با جنین­های آزمایشگاهی………………………………………………………………….26

 

1-7- انجماد

 

1-7-1- مراحل اصلی انجماد………………………………………………………………………………………………………………..30

 

1-7-2- راه­های کاهش اثرات زیانبار مواد محافظت کننده…………………………………………………………………..30

 

1-7-3- روش­های انجماد……………………………………………………………………………………………………………………..30

 

1-7-3-1- انجماد شیشه­ای………………………………………………………………………………………………………………….31

 

1-7-3-1-1- عوامل تکنیکی موثر در انجماد شیشه­ای……………………………………………………………………….32

 

1-7-3-1-1-1- زمان تعادل و آبگیری………………………………………………………………………………………………..32

 

1-7-3-1-1-2- سرعت سرد کردن……………………………………………………………………………………………………..32

 

1-7-3-1-1-3- سرعت گرم کردن………………………………………………………………………………………………………35

 

1-7-3-1-1-4- مواد محافظ انجمادی…………………………………………………………………………………………………35

 

1-7-3-1-1-5- نقش ضد یخ­ها……………………………………………………………………………………………………………36

 

1-7-3-1-1-6- ذوب و آبدهی…………………………………………………………………………………………………………….. 36

 

1-8- آلدوسترون…………………………………………………………………………………………………………………………………….37

 

1-8-1- خصوصیات……………………………………………………………………………………………………………………………….37

 

1-8-2- عملکرد…………………………………………………………………………………………………………………………………….38

 

1-9- ارزیابی کیفیت رویان……………………………………………………………………………………………………………………41

 

1-10- سلول­های رویانی……………………………………………………………………………………………………………………….43

 

فصل دوم: بر متون گذشته

 

2-1- اثرات انجماد بر روی تخمک………………………………………………………………………………………………………..46

 

2-2- اثر روش انجماد شیشه­ای…………………………………………………………………………………………………………….47

 

2-3- بیان زیر واحد­های پمپ Na/K ATpase در تخمک و جنین…………………………………………………48

 

2-4- پمپ  Na/K ATpase ……………………………………………………………………………………………………………49

 

2-5- آکواپورین­ها………………………………………………………………………………………………………………………………….51

 

2-6- هچ یا تفریخ………………………………………………………………………………………………………………………………….52

 

2-7- فعال شدن ژنوم رویانی………………………………………………………………………………………………………………..55

 

2-8- متابولیسم رویان…………………………………………………………………………………………………………………………..56

 

2-9- نقش آلدوسترون در بیان پروتیین Na/K ATpase………………………………………………………………..58

 

فصل سوم: مواد و روش­ها

 

3-1- تولید جنین های حاصل از لقاح خارج رحمی (IVF)

 

3-1-1- جمع‌آوری تخمدان‌ها از کشتارگاه و استحصال تخمک‌ها از مایع فولیکولی……………………………61

 

3-1-2- بلوغ آزمایشگاهی تخمک‌ها (IVM)………………..……….…….………………………………………..62

 

3-1-3- لقاح داخل آزمایشگاهی (IVF)……………………………………………………………………………………………..63

 

3-1-3-1- آماده سازی اووسیت­های بالغ شده برای لقاح…………………………………………………………………….63

 

3-1-3-2- آماده سازی اسپرم………………………………………………………………………………………………………………63

 

3-1-4- کشت داخل آزمایشگاهی جنین های حاصل از(IVF)………………………………………………………….64

 

3-1-5- تازه كردن محیط کشت جنین‌ها…………………………………………………………………………………………….65

 

3-2- تهیه محلول‌های انجمادی……………………………………………………………………………………………………………65

 

3-3- مراحل انجام روند انجماد شیشه ای…………………………………………………………………………………………….66

 

3-4- محیط ذوب…………………………………………………………………………………………………………………………………..66

 

3-5- گروه­های آزمایشی و طراحی مطالعه……………………………………………………………………………………………66

 

3-6- ارزیابی جنین‌ها

 

3-6-1- ارزیابی کیفی جنین‌ها با استفاده از رنگ‌آمیزی افتراقی………………………………………………………….68

 

3-7- ایمونوسایتوشیمی پروتئین­های سطحی جنین های گوسفندی(Sheep embryo ICC)……..70

 

فصل چهارم: نتایج

 

4-1- تخمک­های منجمد شده

 

4-1-1- گروه آزمایشی اول، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های

 

 

منجمد-ذوب شده در مرحله GV………………………………………………………………………………………………………….82

 

4-1-2- گروه آزمایشی دوم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم

 

جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های منجمد-ذوب شده…………………………….82

 

4-1-3- گروه آزمایشی سوم، افزودن آلدوسترون در طی IVM،

 

ومتعاقباً انجماد تخمک ها در مرحله MII……………………………………………………………………………………………..83

 

4-1-4- گروه آزمایشی چهارم، یا گروه کننرل……………………………………………………………………………………..83

 

4-2- تخمک های منجمد نشده

 

4-2-1- گروه آزمایشی پنجم، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های غیر منجمد……………….85

 

4-2-2- گروه آزمایشی ششم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های غیر منجمد………………………………………………………………………………………………….85

 

4-2-3- گروه آزمایشی هفتم، یا گروه کنترل……………………………………………………………………………………….86

 

4-3-

 

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

 

 

 

بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..89

 

نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 94

 

پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 95

 

منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 96

 

خلاصه انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………………..113

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

جدول 3-1- ترکیبات محیط HEPES buffered M199……………………………………………………………. 73

 

جدول 3-2- ترکیبات محیط Bicarbonate buffered M199………………………………………………….. 73

 

جدول 3-3- ترکیبات محیطIVF medium “Fert. TALP”……………………………………………………… 74

 

جدول 3-4- ترکیبات محیطRinsing medium “R. TALP”………………………………………………….. 74

 

جدول 3-5- ترکیبات محیط Sperm medium “S. TALP”……………………………………………………. 75

 

جدول 3-6- ترکیبات محیط H-SOF…………………………………………………………………………………………………. 75

 

جدول 3-7- ترکیبات محیطی IVC- SOF……………………………………………………………………………………….. 76

 

جدول 3-8- Medium A……………………………………………………………………………………………………………………… 76

 

جدول 3-9- مواد شیمیایی و تجهیزات…………………………………………………………………………………………………… 77

 

جدول 4-1- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های منجمد-ذوب شده………………………………………………83

 

جدول 4-2- حضور آلدوسترون در محیط کشت  در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های تازه……………………………………………………………………. 86

 

جدول 4-3- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی و تأثیر آن بر تعدا سلول های در تعدادی از سلول­های بلاستوسیست در تقسیم جنین­های حاصل از تخمک­های تازه………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 86

 

 

 

                                                                                       

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

نمودار 4-1- تاثیر آلدسترون روی بیان زیرواحد های α1 و β1 پمپ  ATPase سدیم

 

و پتاسیم در مدت IVM   یا  IVC – روز چهارم- در محیط کشت سلولهای

 

بلاستوسیت. نوارها با حروف مختلف نشان دهنده تفاوت معنی­دار می­باشد…………………………………………. 87

 

 

 

 

 

 

 

فهرست اشکال

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

شکل 1-1- روند انجام اووژنزیزیس و اسپرماتوژنزیس……………………………………………………………………………. 10

 

شکل 1-2- روند انجام لقاح از زمان رشد تخمک…………………………………………………………………………………… 11

 

شکل 1-3- تصاویر شماتیک مراحل نفوذ اسپرم به داخل تخمک……………………………………………………….. 21

 

شکل 1- 4- تصویر شماتیک روند تکامل جنین…………………………………………………………………………………….. 24

 

شکل 1-5- دو مکانیسم عملکرد مولکولی آلدوسترون…………………………………………………………………………… 38

 

شکل 1- 6- سیگنال های آلدوسترون……………………………………………………………………………………………………. 39

 

شکل 1-7- میزان اتصال سلول – سلول در توده سلولی رویان…………………………………………………………….. 44

 

شکل 2-1- اتصالات سلولی در رویان در حال تقسیم ونقش آنها در تشکیل حفره

 

بلاستوسل و تعیین موقعیت سلول­های ترفکتودرم و توده داخلی………………………………………………………… 50

 

شکل2-2- فرایند تشکیل حفره بلاستوسل…………………………………………………………………………………………….. 51

 

شکل2-3-  ساز وکار کنترل فرایند هچ شدن بلاستوسیست……………………………………………………………….. 53

 

شکل 2-4- پدیدۀ فعال شدن ژنوم رویانی……………………………………………………………………………………………… 56

 

شکل 3-1- رنگ آمیزی افتراقی بلاستوسیت های مشتق از تخمک های منجمد…………………………….. 69

 

شکل 3-2- رنگ آمیزی ایمونوسیتوشیمی زیر واحد های α1 و β1 پمپ Na+/K+ ATPase… 72

 

شکل 4-1- تصاویر مورولا و بلاستوسیست تولید شده در آزمایشگاه

 

جنین شناسی پژوهشگاه ابن سینا…………………………………………………………………………………………………………… 84