3-2-1- علائم بروز دیابت——- 4

 

4-2-1- درمان دیابت :———- 5

 

3-1- گیاه جغجغه ((Prosopis farcta————– 8

 

1-3-1- خواص دارویی جغجغه— 8

 

4-1- فسفوفروکتوکیناز 1(PFK-1):—————- 9

 

5-1- ضرورت و اهداف تحقیق :- 13

 

فصل دوم: بر منابع

 

1-2- اثرات ضد دیابتی گیاهان– 16

 

1-1-2- انار-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد 17

 

2-1-2-مكانیسم اثر انار در دیابت:————— 17

 

2-1-2- سیر—————- 19

 

2-2- اثر گیاه برفعالیت وبیان ژن—————- 21

 

فصل سوم: مواد و روشها

 

1-3- موادو روشها———— 25

 

2-3- تهیه عصاره هیدروالکلی برگ گیاه جغجغه—- 27

 

3-3- حیوانات آزمایشگاهی—– 28

 

1-3-3- نحوه گروهبندی:—— 28

 

2-3-3- روش القای دیابت تجربی:————— 29

 

3-3-3- اندازه گیری قند و وزن موشها:———– 29

 

4-3-3- مراحل انجام تشریح:— 29

 

4-3- بررسی بیان ژن———- 31

 

1-4-3- مشخصات توالی ژن PFK-1————- 31

 

2-4-3- طراحی پرایمرها—— 35

 

3-4-3- آماده سازی پرایمر—– 35

 

5-3- استخراج RNA:——— 36

 

1-5-3- استخراج RNA از نمونه های تازه کبد توسط کیت Geneall Hybrid Rtm—— 36

 

1-5-3- بررسی کمیت و کیفیت RNA  استخراج شدهبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————- 38

 

6-3- سنتز cDNA———– 39

 

1-6-3- سنتز cDNA توسط کیتThermo SCIENTIFICبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——— 39

 

7-3- واکنش های PCR——- 41

 

1-7-3 – PCR شیب دمایی—- 41

 

2-7-3- PCR معمولی——– 43

 

8-3- الکترفورز————— 45

 

1-8-3 – مواد مورد نیازجهت تهیه ژل الکتروفورز—- 45

 

1-1-8-3- آگارز————- 45

 

2-1-8-3- اتیدیوم بروماید—– 46

 

3-1-8-3- لودینگ بافر——– 46

 

4-1-8-3-طرز تهیه محلول Tris-Hcl———— 46

 

4-1-8-3- شناساگرهای اندازهDNA————- 47

 

9-3- روش کار با ژل الکترفورز– 47

 

10-3- رسم منحنی استاندارد:– 48

 

10-3- واکنش Real-Time PCR—————- 48

 

11-3- Threshold و مقدار CT:- 50

 

12-3- تعیین توالی محصولات  (Direct Sequencing) PCRبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——– 51

 

10-2-3- آنالیز بیان ژن——- 52

 

13-3- تجزیه وتحلیل داده ها— 52

 

فصل چهارم: نتایج و بحث

 

1-4- جمع آوری نمونه :——- 54

 

2-4- بررسی نتایج وزن موشهای مورد مطالعه—— 54

 

3-4- بررسی نتایج گلوکز ناشتای سرم موشهای مورد مطالعهبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد——— 56

 

5-4- نتایج استخراج RNA:—- 57

 

6-4- نتایج حاصل ازساخت cDNA بر روی ژل آگاروزبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد————– 59

 

7-4-  نتایج تعیین غلظت و کیفیت RNA توسط اسپکتروفتومتریبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد— 61

 

 

1-7-4-  نتایج مربوط به PCR شیب دمایی——- 61

 

8-4- نتایج منحنی استاندارد—- 62

 

1-8-4- منحنی استاندارد ژن TBP————– 63

 

2-8-4-منحنی استاندارد ژن PFK-1————- 63

 

9-4- نتایج واكنش  Real Time PCR———— 64

 

1-9-4- تکثیر ژنPFK——– 65

 

2-9-4-تکثیر ژن TBP——– 66

 

10-4- ارزیابی  کارایی تکثیر ژنهای مور مطالعه از طریق آنالیز منحنی ذوب:———— 66

 

1-10-4- منحنی تغییرات ذوب بر حسب دمای ژن  PFKبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد———- 67

 

2-10-4-منحنی تغییرات ذوب بر حسب دمای ژن TBPبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد———— 67

 

11-4-  آنالیز منحنی ذوب ژن PFK————- 68

 

12-4-آنالیز منحنی ذوب ژن TBP————— 68

 

13-4- نتایج حاصل از Real timePCR ژن PFK 1 بر روی ژل آگارزبلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد– 70

 

14-4- نتایج بررسی بیان ژن PK—————- 70

 

15-4- بحث:—————- 71

 

16-4- پیشنهادات———— 73

 

منابع:-بلافاصله پس از پرداخت لینک دانلود فایل در اختیار شما قرار می گیرد—— 75

 

 

 

 

 

جدول1-3- تجهیزات و دستگاهها……………………………………………………………………………………………….. 26

 

جدول 2-3 پرایمرهای طراحی شده…………………………………………………………………………………………… 35

 

جدول3-3- لیست اجزای کیت استخراج RNA……………………………………………………………………….. 36

 

جدول 4-3 موادلازم برای PCR………………………………………………………………………………………………….. 42

 

جدول 5-3 برنامه PCR شیب دمایی برای تکثیر قطعه حاصل از TBP…………………………………. 42

 

جدول 6-3 برنامه PCR  شیب دمایی برای تکثیر قطعه حاصل از PFK-1…………………………… 43

 

جدول7-3 مواد مورد نیاز برای تهیه بافر Tris-Hcl……………………………………………………………………. 47

 

جدول8-3 مواد و میزان مورد نیاز برای یک واکنش در Real-Time PCR…………………………….. 49

 

جدول9-3 مراحل، دما و زمان مربوطه در یک واکنش Real- time PCR  برای ژن TBP……… 50

 

جدول10-3- شرایط دمایی و زمانی واکنش Real time PCR برای ژن PFK-1………………….. 50

 

 

 

شکل 1-1- محل قرارگرفتن فسفوفروکتوکیناز 1 در کروموزوم شماره 21 انسان…………………. 10

 

شکل2-1- فروکتوز 2-6 بی فسفات مهمترین فعال کننده آنزیم فسفوفروکتوکیناز 1…………. 11

 

شکل3-1- مراحل گلیکولیز…………………………………………………………………………………………………………. 12

 

شکل 1-3- نحوه گاواژ دادن عصاره…………………………………………………………………………………………….. 28

 

شکل 2-3-  تشریح موشها…………………………………………………………………………………………………………… 30

 

شکل 3-3- توالی ژن pfk-1…………………………………………………………………………………………………………. 34

 

شکل 4-3- دستگاه اسپکتوفتومتری…………………………………………………………………………………………… 39

 

شکل 5-3 دستگاه PCR  (Eppendorf –mastercyc gradient)…………………………………………….. 44

 

شکل 6-3 دستگاه الکتروفورز وعکس ژل…………………………………………………………………………………… 48

 

شکل 7-3 دستگاه Real-Time PCR…………………………………………………………………………………………. 49

 

شکل 1-4- فراوانی موشهای مورد مطالعه………………………………………………………………………………….. 54

 

شکل 2-4- اثر مصرف عصاره هیدروالکلی برگ گیاه جغجغه بر وزن موشهای صحرایی……….. 55

 

شکل 3-4- اثر مصرف عصاره هیدروالکلی برگ گیاه جغجغه بر گلوکز ناشتای موشهای صحرایی 57

 

شکل 5-4- نتایج استخراج Total RNA……………………………………………………………………………………. 59