1-1- آنزیمها 2

 

1-2- منابع بیوکاتالیزوری.. 2

 

1-2-1- کاربردهای صنعتی بیوکاتالیزورها 4

 

1-3- نشاسته. 5

 

1-4- آمیلازها 6

 

1-4-1- منابع آلفا آمیلازها 7

 

1-4-1-1- آمیلازهای باکتریایی.. 7

 

1-4-1-2- آمیلازهای قارچی.. 7

 

1-4-2- طبقه بندی آمیلازها 8

 

آنزیمهای هیدرولیز کننده نشاسته به چهار گروه عمومی تقسیم میشوند: 8

 

الف) اندو آمیلازها 8

 

ب) اگزو آمیلازها 8

 

ج) آنزیمهای شاخه شکن.. 8

 

د) تراسفرازها 8

 

1-4-2-1- اندو آمیلازها 8

 

1-4-2-2- اگزو آمیلازها 9

 

1-4-2-3- آنزیمهای شاخه شکن.. 9

 

1-4-3- ساختار آمیلازها 11

 

1-4-4- مکانیسم عمل آلفا-آمیلاز. 13

 

1-4-5- کاربردهای آلفا-آمیلازها 14

 

1-4-5-1- تولید اتانل زیستی.. 15

 

1-4-5-2- صنایع شوینده. 16

 

1-4-5-3- صنایع نساجی.. 16

 

1-4-5-4- کاغذ سازی.. 17

 

1-4-5-5- صنایع غذایی.. 17

 

1-5-4-6- تولید نان و شیرینی پزی.. 17

 

1-4-5-7- تولید شربت گلوکز و فروکتوز. 18

 

فصل دوم. 20

 

بر پژوهش های پیشین.. 21

 

فصل سوم. 25

 

3- ابزار، مواد و روش­های تحقیق.. 26

 

3-1- ابزار. 27

 

3-2- مواد. 28

 

3-2-1- بافرها 28

 

3-2-2- مواد شیمیایی.. 28

 

3-2-3- محیطهای کشت مورد نیاز. 28

 

3-1-4-کشت باکتری مولد آلفا آمیلاز و تشخیص کیفی تولید آنزیم خارج سلولی.. 30

 

3-2- بررسی سینتیک رشد و فعالیت آلفا آمیلازی باکتری در محیط کشت پایه. 30

 

3-3- روشهای استفاده شده در مراحل سنجش و تخلیص آلفا آمیلاز. 31

 

3-3-1- تخلیص آنزیم آلفا آمیلاز. 31

 

3-3-2- تخلیص بر روی ستون DEAE-Cellulose. 31

 

3-3-3- سنجش فعالیت آنزیمی.. 32

 

3-3-3-1-روش سنجش فعالیت آنزیم.. 33

 

3-3-3-2-واحد آنزیمی.. 33

 

3-3-4- سنجش پروتئین.. 34

 

3-3-4-1- سنجش کمی پروتئین به روش برادفورد. 34

 

3-4- روشهای بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آلفا آمیلاز با خلوص نسبی.. 35

 

) 35

 

3-4-2- اثر دما بر فعالیت آلفا آمیلاز با خلوص نسبی.. 37

 

3-4-3- اثر pH بر فعالیت آلفا آمیلاز. 37

 

3-4-4- بررسی پایداری حرارتی آنزیم دارای خلوص نسبی.. 37

 

3-4-5- اثر pH بر پایداری آنزیم دارای خلوص نسبی.. 37

 

3-4-6- روش بررسی اثر یونهای فلزی و EDTA بر فعالیت آنزیمی.. 38

 

 

4- نتایج.. 40

 

سویه 1390BR.. 40

 

4-2- سینتیک رشد و تولید آنزیم آلفا آمیلاز. 41

 

1390BR.. 42

 

4-4- خصوصیات بیوشیمیایی آلفا آمیلاز. 43

 

4-4-1- اثر pH و دما بر فعالیت آلفا امیلاز. 43

 

4-4-2- اثر دما بر پایداری آلفا آمیلاز سویه 1390 BR.. 44

 

4-4-3- اثر pH بر پایداری آنزیم آلفا آمیلاز. 45

 

) 46

 

4-7- اثر یونهای فلزی بر فعالیت آنزیم.. 47

 

5- بحث و نتیجه گیری.. 50

 

پیشنهادات.. 54

 

 

 

 

 

فهرست جدول­ها

 

 

 

 

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

جدول 1- 1. کاربردهای مختلف آنزیم­ها. 4

 

جدول 1-3) ترکیبات بافر Mix. 28

 

جدول 3-2) نام و اجزاء محیط کشت­های مورد استفاده. 29

 

جدول 3-2) اجزاء محیط کشت جامد. 29

 

جدول 3-3. موادلازم در تهیه محلول برادفورد. 35

 

جدول 4-1) اثر یون­های فلزی بر فعالیت آنزیم. 48

 

 

 

 

 

فهرست شکل­ها

 

 

 

 

 

عنوان                                                                                                 صفحه

 

شکل 1-1) منابع تجاری آنزیم­ها. 3

 

شکل 1-2) گرانول نشاسته در گیاهان مختلف (الف: نشاسته سیب زمینی شیرین، ب: نشاسته سیب زمینی، ج: نشاسته گندم، د: نشاسته ذرت و هـ: نشاسته برنج) 5

 

شکل 1-3) ساختار آمیلوز (الف) و آمیلوپکتین(ب). 6

 

شکل 1-4) انواع آمیلازها و عملکرد و محصول آنها. 10

 

     12

 

شکل 1-6) یون­های کلسیم در ساختار آلفا آمیلاز. 13

 

شکل 4-1) کلنی باکتری 1390BR در محیط نشاسته- آگار. هاله تشکیل شده اطراف کلنی­ها نشان دهنده فعالیت آلفا آمیلازی می­باشد. 40

 

 

 

فهرست نمودار­ها

 

 

 

 

 

عنوان                                                                                                         صفحه

 

نمودار 3-1) منحنی استاندارد غلظت­های مختلف D-مالتوز در طول موج nm 540.. 34

 

نمودار 4-1) رشد باکتری 1390BR.. 41

 

نمودار 4-2) تولید آنزیم برحسب زمان پس از القا نشاسته 1/0%. 41

 

نمودار 4-3) کروماتوگرام ستون DEAE Cellulose. 42

 

نمودار 4-4( اثر pH بر فعالیت آلفا آمیلاز در دمای ˚C 70. فعالیت نسبی به عنوان درصدی از حداکثر فعالیت دیده شده در0/6 ~pH می­باشد که 100% در نظر گرفته شده است. 43