1-9-1 سیکلواکسیژنازها و سنتز پروستانوئیدها……………………………………………………………………………………………………….25

 

1-10 مكانیسم­های صرع­زایی…………………………………………………………………………………………………………………………………26

 

1-11 مکانیسم صرع زایی PTZ…………………………………………………………………………………………………………………………….29

 

1-12 نقش گیرنده­ی NMDA در تشنج­زایی توسط PTZ ……………………………………………………………………………………..30

 

1-13 نقش كانال پتاسیم در تشنج­زایی توسط PTZ ……………………………………………………………………………………………….30

 

 1-14 تاریخچه­ی درمان دارویی ضد صرع …………………………………………………………………………………………………………..31

 

1-15 مکانیسم داروهای ضدصرع ………………………………………………………………………………………………………………………..31

 

1-16 کمک حلال ها یا حامل ها(vehicles)………………………………………………………………………………………………………….32

 

1-16-1معرفی کمک حلال Polysorbate 20 ……………………………………………………………………………………………………..32

 

1-17 دلایل استفاده ازگیاهان دارویی ومعطر…………………………………………………………………………………………………………..35

 

1-18 رده بندی گیاه درمنه کوهی………………………………………………………………………………………………………………………….35

 

…………………………………………………………………………………………..35.Artemisia L. 1-18-1پراکنش جغرافیایی جنس درمنه

 

1-18-2 پراکنش جغرافیایی گونه درمنه کوهی یاB.  Artemisia Aucheri …………………………………………………………..36

 

1-18- مشخصات درمنه کوهی……………………………………………………………………………………………………………………………36

 

1-18-4 خواص فارماکولوژیکی گیاه……………………………………………………………………………………………………………………..38

 

 

 

 

الف

 

1-18-5 ترکیبات شیمیایی گیاه …………………………………………………………………………………………………………………………….38

 

فصل دوم: مواد و روش کار

 

2-1 مواد و وسایل………………………………………………………………………………………………………………………………………………42

 

2-1-1 مواد……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….42

 

2-1-2 وسایل ودستگاه ها…………………………………………………………………………………………………………………………………..42

 

2-1-3 گیاه……………………………………………………………………………………………………………………………………………………….44

 

2-1-4 حیوانات ……………………………………………………………………………………………………………………………………………….44

 

2-2 روش ها………………………………………………………………………………………………………………………………………………………44

 

2-2-1 روش عصاره گیری (تهیه عصاره اتانلی گیاه) ……………………………………………………………………………………………..44

 

2-2-2 روش تهیه محلول تزریقی از عصاره گیاه(بخش اول پژوهش)……………………………………………………………………….44

 

2-2-3 روش انجام آزمایش(بخش دوم پژوهش)…………………………………………………………………………………………………….45

 

2-2-4 شاخص­های مورد سنجش…………………………………………………………………………………………………………………………46

 

2-2-5 روش محاسبه آماری- تجزیه وتحلیل آماری………………………………………………………………………………………………..47

 

فصل سوم: نتایج ونمودارها

 

3-1 نتایج آزمون آماری بخش اول پژوهش…………………………………………………………………………………………………………….49

 

3-1-1 نتایج حاصل از مقایسه گروه کنترل وشم(باتویین5%)……………………………………………………………………………………49

 

3-1-2 نتایج حاصل از مقایسه گروه کنترل وشم(باتویین1%)……………………………………………………………………………………56

 

3-2 نتایج آزمون آماری بخش دوم پژوهش……………………………………………………………………………………………………………63

 

3-2-1نتایج حاصل از مقایسه گروههای مختلف آزمایشی……………………………………………………………………………………….63

 

فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری

 

4-1 بحث ونتیجه گیری نهایی پژوهش…………………………………………………………………………………………………………………71

 

4-2 نتیجه گیری کلی………………………………………………………………………………………………………………………………………….76

 

4-3پیشنهادات ………………………………………………………………………………………………………………………………………………….76

 

منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………77

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

	ب

 

 

 

فهرست جداول

 

 

 

 

 

جدول1-1 مشخصات کمک حلال پلی سوربات 20……………………………………………………………………………………………….32

 

جدول2-1 خلاصه ای از روش انجام آزمایش…………………………………………………………………………………………………………45

 

جدول 3-1درصد مرگ ومیر بین گروه های دریافت کننده سالین وتویین5% درمقایسه باگروه کنترل………………………………51

 

جدول3-2: درصد مرگ ومیر بین گروه های دریافت کننده سالین وتویین1% درمقایسه باگروه کنترل……………………………..56

 

جدول3-3: درصد مرگ ومیر بین گروه ها ی دریافت کننده عصاره درمقایسه باگروه شم……………………………………………..64

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

	ج

 

 

 

فهرست شکل ها

 

 

 

شکل1-1 کمپلکس سوزنی موجی(Spike-waves)………………………………………………………………………………………………………..  15

 

شکل 1-2 گیاه درمنه کوهی در فصل رویشی (انبان کوه دامغان خرداد1390……………………………………………………………..37

 

شکل 1-3 گیاه درمنه کوهی در فصل زایشی ………………………………………………………………………………………………………..37

 

شکل 2-1 : مواد ، وسایل ودستگاه ها………………………………………………………………………………………………………………….43

 

شکل 2-2: روش تزریق درون صفاقی………………………………………………………………………………………………………………….46

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

	د

 

 

 

فهرست نمودارها

 

 

 

نمودار3-1 مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله اول تشنج در گروه­شم(تویین 5%) نسبت به گروه کنترل…………50

 

نمودار3-2: مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله دوم تشنج در گروه­شم(تویین 5%)  نسبت به گروه کنترل………51

 

نمودار3-3:مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله پنجم تشنج در گروه­شم(تویین 5%)  نسبت به گروه کنترل………52

 

نمودار3-4: مقایسه میانگین تعداد ورود به مرحله 5تشنج در گروه­شم(تویین 5%)  نسبت به گروه کنترل…………………………53

 

نمودار3-5: مقایسه­ی میانگین امتیاز تشنجی در گروه­شم(تویین5%)نسبت به گروه کنترل……………………………………………….54

 

نمودار3-6: مقایسه­ی میانگین مدت زمان دوام تشنج در گروه­شم(تویین 5%)  نسبت به گروه کنترل………………………………..55

 

نمودار3-7: مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله اول تشنج در گروه­شم(تویین1%)نسبت به گروه کنترل………..57

 

نمودار3-8: مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله دوم تشنج در گروه­شم(تویین1%) نسبت به گروه کنترل……….58

 

نمودار3-9: مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله پنجم تشنج در گروه­شم(تویین1%) نسبت به گروه کنترل……..59

 

نمودار3-10: مقایسه­ی میانگین تعداد ورود به مرحله5 تشنج در گروه­شم (تویین1%) نسبت به گروه کنترل…………………..60

 

نمودار3-11: مقایسه­ی میانگین امتیاز تشنجی در  گروه­شم(تویین1%) نسبت به گروه کنترل ……………………………………….61

 

نمودار3-12: مقایسه­ی میانگین مدت زمان دوام تشنج در گروه­شم(تویین1%) نسبت به گروه کنترل…………………………….62

 

نمودار3-13: مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله اول تشنج در گروه­های آزمایشی نسبت به گروه شم………..65

 

نمودار 3-14: مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله دوم تشنج در گروه­های آزمایشی نسبت به گروه شم……….66

 

نمودار3-15: مقایسه­ی میانگین زمان لازم برای شروع مرحله پنجم تشنج در گروه­های آزمایشی نسبت به گروه شم………67

 

نمودار 3-16: مقایسه­ی میانگین تعداد ورود به مرحله5 تشنج در گروه­های آزمایشی نسبت به گروه شم………………………68

 

نمودار 3-17:مقایسه­ی میانگین امتیاز تشنجی در گروه­های آزمایشی نسبت به گروه شم……………………………………………..69

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

	ه

 

 

 

چکیده

 

گونه های مختلف جنس درمنه به عنوان دارو دردرمان برخی از بیماری  هادربررسی های فیزیولوژیک وفارماکولوژیک به کار می رود .با توجه به این که گونه درمنه کوهی دارای مقادیر زیادی اسانس ازگروه ترپنوئیدخصوصا” لاکتون های سزکویی ترپن وکتون های مونوترپن با طیف وسیعی از فعالیت های بیولوژیک می باشد ، می تواندبرخی ازعملکرد های فیزیولوژیک بدن راتحت اثرقراردهد. دراین تحقیق اثر عصاره الکلی درمنه کوهی بر تشنج ناشی ازپنتیلن تترازول موردبررسی قرار گرفته است.

 

در این مطالعه از موش های سوری نرنژاد NMRI با وزن22-28گرم استفاده شد.حیوانات به سه گروه تقسیم شدند:1)گروه کنترل که مورد تزریق داخل صفاقی سالین قرار گرفتند.2)به گروه شم سالین وکمک حلال تویین20(1%)تزریق گردید.3)گروه آزمایش که شامل سه زیرگروه بود. دراین زیر گروه­ها موش­ها دوز­های  mg/kg5/7، 25/6، 5 عصاره گیاه به همراه کمک حلال Tween20 (1%) و سالین دریافت کردند. روش القاء صرع به این ترتیب بودکه 20 دقیقه پس ازتزریق درون صفاقی مقادیرفوق، کلیه گروه ها به میزانmg/kg80 پنتیلن تترازول نیز به همین روش دریافت کردند. نشانه­های تشنجی طی مدت 20 دقیقه مورد ارزیابی قرارگرفتند. داده های حاصل از بخش اول پژوهش توسط آزمون تست T ((T-test مورد تجزیه و تحلیل آماری قرارگرفتند. مقایسه آماری نشان دادکه کمک حلال تویین 20(5%)شروع مراحل 1و2رابه طور معنی داری به تاخیر انداخت(P<0.01) وهمچنین شروع مرحله 5را نیزبه طور معنی داری به تاخیر انداخت(P<0.05) وتعدادورودبه مرحله5 تشنج را به طور معنی داری کاهش داد(P<0.01)ولی باتوجه به این که امتیازتشنجی راکاهش داد، اثر معنی داری روی آن نداشت وازطرفی باعث افزایش معنی داردوام تشنج یاطول تشنج گردید(P<0.05)  ودرصد مرگ ومیر کاهش پیدا کرد. بنابراین  باکاهش میزان کمک حلال تا1% اثرمعنی داری بر تشنج مشاهده نشد. داده های حاصل از بخش دوم پژوهش توسط آنالیز واریانس یک طرفه (onewayANOVA) مورد تجزیه و تحلیل آماری قرارگرفتند ومقایسه آماری نشان داد که عصاره درمنه کوهی دردوز  5/7میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن به طورمعنی داری زمان لازم برای شروع مرحله 2و 5 را با (P<0. 05) تسریع کرد و در همین دوز امتیاز تشنجی را به طور معنی داری در مقایسه با گروه شم با (P<0. 01) و با گروه دریافت کننده عصاره با دوز5 میلی گرم با (P<0. 05) افزایش داد. همچنین دوز­های25/6 با (P<0. 05) و 5/7 با (P<0. 01) به طور معنی داری ورود به مرحله5 را افزایش دادند. از طرفی میزان مرگ ومیر به طور وابسته به دوز افزایش پیدا کرد.

 

7-1رنگیزه های گیاهی.. 15

 

8-1جوانه زنی.. 18

 

1-8-1 عوامل درونی موثر بر جوانه زنی.. 18

 

11-1اهداف مشخص تحقیق.. 21

 

12-1سؤالات تحقیق.. 21

 

13-1فرضیه‏های تحقیق.. 22

 

14-1تعریف واژه‏ها و اصطلاحات فنی و تخصصی.. 22

 

بر تحقیقات انجام شده 24

 

1-2پیشینه ی تحقیق   24

 

فصل سوم: مواد و روشها 32

 

1-3شرح مطالعه. 32

 

2-3 مواد و وسایل مورد استفاده در این پروژه ی تحقیقاتی.. 33

 

2-3-1 ابزار 33

 

2-2-3 مواد 34

 

1-2-3 توضیحی مختصر درمورد مواد و وسایل مورداستفاده 34

 

3-3 تهیه ی بذور 35

 

4-3 استریل کردن تمام ابزار و محیط کار 35

 

5-3 تهیه ی مواد شیمیایی و مقادیر مورد نظر آنها 35

 

6-3 تهیه ی محلول ها 35

 

7-3 ضدعفونی و شستشوی بذور 37

 

8-3 ضدعفونی پتری دیش ها 37

 

شکل 4-3پتری دیش های حاوی بذور و محلول. 38

 

9-3 کاشت بذور 38

 

10-3 آبیاری و جوانه زنی بذور 38

 

11-3 اجرای آزمایش در مرحله ی گیاهچه ای.. 39

 

12-3 اندازه گیری طول ساقه چه و ریشه چه. 40

 

13-3 اندازه گیری رنگیزه های فتوسنتزی.. 41

 

فصل چهارم: نتایج  43

 

1-4 نتایج بادرنجبویه. 44

 

1-1-4جوانه زنی.. 44

 

2-1-4 طول ریشه چه. 45

 

3-1-4 طول ساقه چه. 46

 

4-1-4 کلروفیل a. 47

 

5-1-4 کلروفیل b. 48

 

6-1-4 کاروتنوئیدها 49

 

2-4 نتایج نعناع فلفلی.. 50

 

1-2-4 جوانه زنی.. 51

 

2-2-4 طول ریشه چه. 51

 

3-2-4 طول ساقه چه. 52

 

4-2-4 کلروفیل a. 53

 

5-2-4 کلروفیل b. 54

 

6-2-4 کاروتنوئیدها 55

 

3-4 نتایج سنبل الطیب.. 57

 

1-3-4 جوانه زنی.. 57

 

2-3-4 طول ریشه چه. 58

 

3-3-4 طول ساقه چه. 59

 

4-3-4 کلروفیل a. 60

 

5-3-4 کلروفیل b. 61

 

6-3-4 کاروتنوئیدها 62

 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری   64

 

1-5 بحث.. 64

 

2-5 نتایج بادرنجبویه. 66

 

1-2-5 جوانه زنی.. 66

 

 

2-2-5 طول ریشه چه. 67

 

3-2-5 طول ساقه چه. 68

 

4-2-5 کلروفیل a و b. 69

 

5-2-5 کاروتنوئیدها 69

 

3-5 نتایج نعناع فلفلی.. 71

 

1-3-5 جوانه زنی.. 71

 

2-3-5 طول ریشه چه. 71

 

3-3-5 طول ساقه چه. 72

 

4-3-5 کلروفیل a و b. 72

 

5-3-5 کاروتنوئیدها 73

 

4-5 نتایج سنبل الطیب.. 75

 

1-4-5 جوانه زنی.. 75

 

2-4-5 طول ریشه چه. 76

 

3-4-5 طول ساقه چه. 76

 

4-4-5 کلروفیل a و b. 77

 

5-4-5 کاروتنوئیدها 77

 

5-5 نتیجه گیری.. 78

 

پیشنهادات. 80

 

منابع  أ‌

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جدول

 

جدول 1-3 ابزار مورد استفاده در تحقیق                                                                     33

 

جدول 2-3 مواد مورد استفاده در تحقیق                                                                     34

 

جدول 1-4آنالیز نتایج بادرنجبویه                                                                                                  44

 

جدول 2-4 آنالیز نتایج نعناع فلفلی                                                                          50

 

جدول 3-4 آنالیز نتایج سنبل الطیب                                                                          57

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها و تصاویر

 

 

 

شکل 1-3دستگاه اولتراسونیک                                                                                                        36

 

شکل 2-3ستگاه اولتراسونیک و حل کردن نانوذرات تیتانیوم دی اکسید در آب                                           36

 

شکل 3-3دستگاه اولتراسونیک و حل کردن  تیتانیوم دی اکسید در آب                                                     37

 

شکل 4-3پتری دیش های حاوی بذور و محلول                                                                                  38

 

شکل 5-3 جوانه زنی بذور                                                                                                             39

 

شکل 6-3 کشت گلدانی                                                                                                                40

 

شکل 7-3 اندازه گیری طول ریشه چه و ساقه چه                                                                                41

 

شکل 8-3 اندازه گیری رنگیزه های فتوسنتزی                                                                                     42

 

 

 

فهرست نمودارها

 

نمودار1-4- اثر تیتانیوم و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید دی اکسید بر جوانه زنی بادرنجبویه                             45

 

نمودار2-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر طول ریشه چه ی بادرنجبویه                     46      نمودار3-4- اثرتیتانیوم دی اکسید و  نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر طول ساقه چه ی بادرنجبویه                            47

 

نمودار4-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل a بادرنجبویه                            48

 

نمودار5-4- اثر تیتانیوم دی اکسید  و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل b بادرنجبویه                             49

 

نمودار6-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کاروتنوئید بادرنجبویه                             50

 

نمودار7-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر جوانه زنی نعناع فلفلی                              51

 

نمودار8-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر طول ریشه چه ی نعناع فلفلی                  52

 

نمودار9-4-  اثر تیتانیوم دی اکسید‌ونانوذره ی تیتانیوم دی اکسیدبرطول ساقه چه‌ی نعناع فلفلی                          53

 

نمودار10-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل a نعناع فلفلی                         54

 

نمودار11-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل b نعناع فلفلی                         55

 

نمودار12-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کاروتنوئید نعناع فلفلی                         56

 

نمودار13-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر جوانه زنی سنبل الطیب                         58

 

1 -5-3- سیگار……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………10

 

1-5-4- فاکتورهای ژنتیکی…………………………………………………………………………………………………………………………………………11

 

1-6- مخاط معده…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….12

 

1-7- موکوس معده…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………12

 

1-8- پروتئین های گاستروکین …………………………………………………………………………………………………………………………………….13

 

1-8-1- ژن GKN1 …………………………………………………………………………………………………………………………………………………….15

 

1-8-2-نقش GKN1 در معده و سرطان معده…………………………………………………………………………………………………………..16

 

1-9- ارتباط پلی مورفیسم‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ ژنتیکی با خطر ابتلا به سرطان…………………………………………………………………………………..18

 

1-10- اهداف تحقیق…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….20

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فصل دوم:پیشینه تحقیق

 

فصل سوم:مواد و روش ها

 

3-1- وسایل و مواد مورد استفاده در این مطالعه…………………………………………………………………………………………………………..24

 

3-2- نوع مطالعه……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..26

 

3-3- جامعه آماری و نمونه گیری………………………………………………………………………………………………………………… ………………26

 

3-4- رضایت نامه…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….27

 

3-5- روش تهیه محلول‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مورد نیاز جهت انجام الکتروفورز……………………………………………………………………………………..27

 

3-5-1-روش تهیه بافر الکتروفورز TBE در حجم 500 میلی لیتر……………………………………………………………………………..27

 

3-5-2- محلول رنگ آمیزی DNA Stain ………………………………………………………………………………………………………………….28

 

3-6- استخراج DNA از خون………………………………………………………………………………………………………………………………………….28

 

3-7- تهیه ژل آگارز و الکتروفورز…………………………………………………………………………………………………………………………………….29

 

3-8- طراحی پرایمر…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………30

 

3-9- تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1……………………………………………………………..………………………………………………………. 31

 

3-10- توالی یابی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..35

 

3-11- شناسایی SNPهای پروموتر ژن GKN1 …………………………………………………………………………………………………………….35

 

3-12- تکنیک  Tetra Primer ARMS- PCR………………………………………………………………………………………………………………..35

 

3-13- تعیین ژنوتیپ  SNP با شناسه های rs4575760  و rs4072127 با روش Tetra- primer ARMS PCR…………37

 

3-14- آنالیز آماری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….42

 

پرسشنامه………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….43

 

فصل چهارم-نتایج

 

4-1- مشخصات جمعیت مورد مطالعه…………………………………………………………………………………………………………………………44

 

4-2- بررسی ارتباط فاکتورهای خطر با سرطان معده………………………………………………………………………………………………….47

 

4-2-1- عفونت هلیکوباکتر پیلوری…………………………………………………………………………………………………………………………..47

 

4-2-2- مصرف الکل…………………………………………………………………………………………………………………………………………………..48

 

4-2-3- ازدواج فامیلی والدین……………………………………………………………………………………………………………………………………49

 

4-2-4- سابقه سرطان در خانواذه……………………………………………………………………………………………………………………………..51

 

4-3- بررسی کیفیت DNA استخراج شده…………………………………………………………………………………………………………………..51

 

4-4- تکثیر ناحیه پروموتری ژن‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ GKN1……………………………………………………………………………………………………………………..52

 

4-5- شناساییSNP  های ناحیه پروموتری ژن GKN1………………………………………………………………………………………………53

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4-6- تعیین ژنوتیپ  SNPبا شناسه‌های rs4575760 وrs4072127  با تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR………55

 

4-7- بررسی ارتباط پلی مورفیسم rs 4575760  ژنGKN1  با خطر ابتلا به سرطان معده……………………………………….58

 

4-8– بررسی ارتباط پلی مورفیسم rs 4072127 ژن GKN1 با خطر ابتلا به سرطان معده……………………………………….58

 

4-9- بررسی ارتباط پلی مورفیسم‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ ژنGKN1   با نوع تومور………………………………………………………………………………..60

 

فصل پنجم-بحث و نتیجه گیری

 

5-1- عوامل موثر در ابتلا به سرطان معده…………………………………………………………………………………………………………………62

 

5-1-1- بررسی نتایج حاصل از اثر عفونت هلیکوباکتر پیلوری بر ابتلا به سرطان معده………………………………………….63

 

5-1-2- بررسی نتایج حاصل از تاثیر الکل با خطر ابتلا به سرطان معده…………………………………………………………………63

 

5-1-3- سابقه سرطان در خانواده (اقوام درجه یک)……………………………………………………………………………………………….64

 

5-1-4- نتایج حاصل از بررسی ارتباط پلی مورفیسم‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ تک نوکلئوتیدی پروموتر ژن GKN1 با خطر ابتلا به سرطان

 

معده………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………65

 

پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………67

 

رفرنس…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….68

 

چکیده خارجی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….78

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها

 

شکل 1-1-قسمت‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مختلف معده……………………………………………………………………………………………………………………………..4

 

شکل 1- 2- ترکیبات تشکیل دهنده موکوس……………………………………………………………………………………………………………..12

 

شکل1 – 3- ساختار فضایی پروتئین های گاستروکین……………………………………………………………………………………………….14

 

شکل 1-4- بیان GKN_S، TFF_S و موسین‌ها در اپیتلیوم معده موش………………………………………………………………………….14

 

شکل 1-5- جایگاه ژن‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ GKN1، GKN2 و GKN3 بر روی کروموزوم 2 انسان…………………………………………………..15

 

شکل 1-6- موقعیت 38CYS در 3 ژنGKN1، GKN2 و GKN3……………………………………………………………………………16

 

شکل 3-1: نمایی از تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR……………………………………………………………………………………….36

 

شکل 4-1: الکتروفورز DNA استخراج شده بر روی ژل آگارز 1 درصد. …………………………………………………………………..51

 

شکل 4-2:   تکثیر بخشی از ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1A)……………………………………………………………………..52

 

شکل 4-3: تکثیر بخشی از ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1B)………………………………………………………………………..53

 

شکل 4-4 : مقایسه توالی ناحیه پروموتر ژن GKN1 با نرم افزار SeqMan ………………………………………………………………54

 

شکل 4-5: ژنوتیپ‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مختلف در SNP  rs 4557760 در پروموتر ژن GKN1………………………………………………………..54

 

شکل4-6 :ژنوتیپ‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مختلف در SNP 72127  rs 40 در پروموتر ژن GKN1 ……………………………………………………….55

 

شکل4-7: تعیین ژنوتیپ SNP با شناسه 4557760  rs ژن GKN1 با تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR………..56

 

شکل4- 8: تعیین ژنوتیپ SNP با شناسه 4072127  rsژن GKN1 با تکنیک  .Tetra Primer ARMS- PCR………57

 

شکل 5-1: نواحی پروموتری ژن‌های GKN2، TFF1، TFF2 و TFF3 و فاکتورهای رونویسی مربوط به این ژن‌ها….67

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

جدول 1-1– خلاصه ای از پلی مورفیسم‌ها‌یی که با انواع منتشر و روده ای سرطان معده در ارتباط هستند……………19

 

جدول 3-1- توالی پرایمرهای GKN1A و GKN1B…………………………………………………………………………………………………….32

 

جدول 3-2- شرایط PCR جهت تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1A و GKN1B )…………………………………..33

 

جدول 3-3- میزان مواد مورد نیاز PCR جهت تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1…………………………………………………….34

 

جدول 3-5- توالی پرایمرهای مورد استفاده در Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4575760……..37

 

جدول 3-6- توالی پرایمرهای مورد استفاده در Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4072127……..38

 

جدول 3-7- مواد و حجم مورد نیاز برای انجام Tetra- primer ARMS PCR  برای تعیین ژنوتیپrs 4575760 ……39           جدول 3-8- مواد و حجم مورد نیاز برای انجام Tetra- primer ARMS PCR  برای تعیین ژنوتیپ rs 4072127 ….40          جدول3-9- شرایط PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4575760…………………………….. …………………………..41       جدول3-10- شرایط PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4072127………………………………………………………………………………………41        جدول4-1: مشخصات نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های جمعیت A……………………………………………………………………………………………………………….45

 

جدول4-2: مشخصات نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ جمعیت B……………………………………………………………………………………………………………….46

 

جدول 4-3: ژنوتیپ نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ بیمار و شاهد پلی‌مورفیسم rs 4557760 ………………………………………………………………….59

 

جدول 4-4: ژنوتیپ نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ بیمار و شاهد پلی مورفیسم rs 4072127 ………………………………………………………………..59

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

نمودار4-1- فراوانی سرطان های Intestinal (19 نفر)و diffuse (12 نفر) در بیماران آلوده به هلیکوباکتر پیلوری در

 

جمعیت A……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..47

 

نمودار 4-2- فراوانی سرطان های Intestinal (17 نفر) و diffuse (11 نفر) در مبتلایان به هلیکوباکتر پیلوریدر

 

جمعیت B…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….48

 

نمودار4-3: فراوانی افراد الکلی و غیر الکلی در گروه بیمار و شاهد در جمعیت A……………………………………………………49

 

1-6- علایم خارج شدن توازن باکتری­های روده.. 13

 

1-7- پروبیوتیک­ها.. 13

 

1-8- منافع مصرف پروبیوتیک­ها.. 13

 

1-9- اشکال پروبیوتیک­ها.. 14

 

1-10- پری بیوتیک­ها.. 14

 

1-11- باکتری­های بی­هوازی احیاکننده سولفات.. 15

 

1-12- نقش باکتری­های احیا کننده سولفات در طبیعت.. 15

 

1-13- نقش باکتری­های احیا کننده سولفات  در صنعت نفت.. 16

 

1-14- خوردگی میکروبی.. 16

 

1-15- واکنش­های احیای ترموشیمیایی سولفات.. 17

 

1-16-  سیستم­های آلوده به SRB.. 17

 

1-17- اهداف، فرضیات و پرسش اصلی پژوهش.. 18

 

1-17-1 اهداف اصلی.. 18

 

1-17-2 اهداف اختصاصی.. 18

 

1-17-3 اهداف کاربردی.. 18

 

1-17-4 فرضیات پژوهش.. 18

 

1-17-5 پرسش اصلی پژوهش.. 18

 

فصل دوم: پیشینه پژوهش

 

2-1- پژوهش­های انجام گرفته در سطح جهان.. 20

 

2-2- پژوهش­های انجام گرفته در ایران.. 23

 

فصل سوم: روش شناسی تحقیق

 

3-1- مواد و روش کار.. 25

 

3-2- محیط کشت مورد نیاز.. 26

 

3-3- انتخاب بیماران مورد نظر برای نمونه­برداری.. 26

 

3-4- ارزیابی تاثیر آنتی بیوتیک ها برروی باکتری­های  SRB.. 30

 

3-4-1 آنتی بیوتیک کلیندامایسین.. 30

 

3-4-2 آنتی بیوتیک جنتامایسین.. 31

 

3-4-3 آنتی بیوتیک مترونیدازول.. 31

 

3-5- ارزیابی خواص ضدمیکروبی آنتی بیوتیک­ها بر باکتری­های SRB مثبت   32

 

3-6- تعیین هویت مولکولی باکتری­های SRB مثبت.. 33

 

3-7- آنالیز آماری.. 33

 

 

 

 

 

فصل چهارم: نتایج یافته های تحقیق

 

4-1- مقدمه.. 35

 

4-2- تجزیه و تحلیل نتایج جمعیت شناختی.. 35

 

4-2-1 جنسیت.. 36

 

4-2-2 سن.. 37

 

4-2-3 میزان تحصیلات.. 38

 

4-2-4 میزان درآمد.. 39

 

4-3- ارزیابی فرضیات پژوهش.. 40

 

4-3-1 فرضیه اول.. 40

 

4-3-2 فرضیه دوم.. 43

 

4-3-3 فرضیه سوم.. 45

 

4-3-4 فرضیه چهارم.. 47

 

4-3-5 فرضیه پنجم.. 48

 

4-3-6 فرضیه ششم.. 50

 

4-4- نتایج آزمایش  PCR.. 54

 

.. 54

 

4-4-2 تأیید PCR ژن16S rRNA.. 55

 

4-4-3 توالی تعیین ترادف شده قطعه 16S rRNA.. 56

 

4-4-4 آنالیز فیلوژنتیکی.. 57

 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

otif.ir/پایان-نامه-بررسی-باکتری-های-احیاء-کنند/

 

5-1- بحث.. 63

 

5-2- نتیجه گیری.. 67

 

5-3- پیشنهادات.. 67

 

منابع و مآخذ.. 68

 

فهرست منابع فارسی.. 68

 

فهرست منابع انگلیسی.. 70

 

چکیده انگلیسی.. 73

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

جدول 3-1: پرسشنامه مورد استفاده در این پژوهش. 25

 

جدول 3-2: ترکیبات محیط کشت API 26

 

جدول 3-3: خصوصیات بالینی افراد انتخاب شده برای نمونه­برداری   28

 

جدول 4-1: توزیع فراوانی و افراد بر حسب جنسیت. 36

 

جدول 4-2: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب گروههای سنی. 37

 

جدول 4-3: توزیع فراوانی و در پاسخ دهندگان بر حسب میزان تحصیلات   38

 

جدول 4-4: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب میزان درآمد   39

 

جدول 4-5: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب گروه های سنی و بیماری   40

 

جدول 4-6: ضریب همبستگی متغیرهای سن افراد و بیماری. 42

 

جدول 4-7: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس درامد و بیماری   43

 

جدول 4-8: ضریب همبستگی متغیرهای سن افراد و بیماری. 44

 

جدول 4-9: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری   45

 

جدول 4-10: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس جنسیت و سابقه مصرف آنتی­بیوتیک. 47

 

جدول 4-11: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه سنی و تحصیلات   48

 

جدول 4-12: ضریب همبستگی متغیرهای تحصیلات افراد و بیماری   49

 

جدول 4-13: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه های سنی وتاثیر آنتی­بیوتیک­ها. 50

 

جدول 4-14: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی. 51

 

جدول 4-15: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی جنتامایسین   52

 

جدول 4-16: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی مترونیدازول   53

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

نمودار 4-1: فراوانی و نسبت افراد مورد پژوهش بر حسب جنس   36

 

نمودار 4-2: توزیع درصد نمونه آماری افراد برحسب سن. 36

 

نمودار 4-3: فراوانی افراد مورد پژوهش  بر حسب میزان تحصیلات   38

 

نمودار 4-4: توزیع در صد نمونه آماری افراد  بر حسب میزان درآمد   39

 

نمودار 4-5: نمودار توافقی سن و بیماری آپاندیسیت. 41

 

نمودار 4-6: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس آپاندیسیت   41

 

نمودار 4-7: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس درامد و بیماری   43

 

نمودار 4-8: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری آپاندیسیت. 46

 

نمودار 4-9: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری عفونت روده. 46

 

نمودار 4-10: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس جنسیت و سابقه مصرف آنتی­بیوتیک. 47

 

نمودار 4-11:  فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه سنی و تحصیلات   48

 

نمودا 4-12: ارزیابی تاثیر کیفی داروی کلیندامایسین بر باکتری­های احیا کننده سولفات جدا شده از گروه­های سنی. 51

 

نمودار 4-13: ارزیابی تاثیر کیفی داروی جنتامایسین بر باکتری های احیا کننده سولفات جدا شده از گروه های سنی. 52

 

نمودار 4-14: ارزیابی تاثیر کیفی داروی مترونیدازول بر باکتری­های احیا کننده سولفات  جدا شده از گروه­های سنی. 53

 

 

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

شکل 1-1: آپاندیس ملتهب و متورم (آپاندیسیت).. 6

 

شکل 1-2: فلور طبیعی روده.. 10

 

شکل 3-1: مرحله جداکردن زائده آپاندیس.. 27

 

شکل 3-2: تلقیح باکتری­های SRB)) به محیط مایع API. 30

 

شکل 3-3: تاثیر آنتی بیوتیک­ها بر رشد باکتری های SRB.. 32

 

شکل 4-1: تصویر الکتروفورز حاصل از DNA استخراج شده از باکتری.   54

 

شکل 4-2: تصویر الکتروفورز حاصل از تکثیر ژن 16S rRNA باکتری.   55

 

 

 

 

 

 

 

 چکیده

 

باکتری­های احیا کننده سولفات (SRB) گروه بزرگی از میکروارگانیسم­های بی­هوازی هستند که نقش بسیار مهمی در بسیاری از فرآیندهای بیوژئوشیمیایی ایفا می­کنند. این پژوهش با هدف شناسایی وتعیین هویت مولکولی باکتری­های احیا کننده سولفات و نقش آن­ها در عفونت­های روده بزرگ و آپاندیسیت در شهر کرمان انجام شد. روش کار: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی در سال 1391 تا 1392 بر روی 50 بیمار مراجعه کننده به بیمارستان­های مختلف شهر کرمان انجام شد. تمامی افراد مورد بررسی دارای مشکلات عفونت روده بزرگ ویا آپاندیسیت بودند. در بین این افراد نمونه­گیری از حفره شکم و روده ی بزرگ انجام شد. سپس نمونه­های تهیه شده به محیط کشت اختصاصی API تلقیح و 2 ماه در دمای 35 درجه سانتی گراد گرماگذاری شدند. سپس نمونه­های مثبت پس از کشت مجدد در محیط جامد اختصاصیSRB ، برای خالص سازی بیشتر به محیط جدید API  منتقل گردید. شناسایی مولکولی جدایه ها با استفاده از پرایمر یونیورسال  16s rRNA و مقاومت آنتی بیوتیکی صورت گرفت. از مجموع نمونه­های مورد پژوهش از6 مورد (12%) نمونه­های مشکوک به SRB جداسازی گردید. اما با روش مولکولی در4 مورد (8%) باکتری های احیا کننده سولفات شناسایی شد. بیشترین گونه ی باکتری­های (SRB) مربوط به سویه Desulfovibrio piger بود. همچنین بین جداسازی باکتری­های SRB، سن و میزان تحصیلات افراد ارتباط معنی­داری مشاهده شد مناسب­ترین آنتی­بیوتیک برای حذف باکتری­های SRB کلیندامایسین شناسایی شد. با توجه به نقش احتمالی باکتری­های SRB در  ایجاد سرطان کلون و عفونت­های روده­ای، ضرورت انجام پژوهش­های تکمیلی و پایش مداوم بالینی در جمعیت­های گسترده تر و ارزیابی نقش بیوسایدها وآنتی­بیوتیک­ها در حذف این باکتری­ها وجود دارد.

 

 

 

واژگان کلیدی: باکتری­های احیا کننده سولفات، عفونت­های روده بزرگ، 16s rRNA

 

مقدمه

 

باکتری­های احیا کننده سولفات SRB به طور وسیعی در اقیانوس، آب­های شیرین، لجن­ها پراکنده­اند. این باکتری­ها از سولفات به عنوان پذیرنده نهایی الکترون استفاده و سولفید هیدروژن تولید می­نمایند. تا اکنون 14 جنس از این گروه باکتری­ها شناخته شده که به جز دسولفونما ویبرو تمامی آن­ها گرم منفی می­باشند. یک جنس از این باکتری­ها به نام دسولفوویبرو می­تواند در هنگام تکثیر فعال خود بیش از 10 گرم در لیتر سولفید هیدروژن تولید نماید (آبیارد 1382، 12-11؛ ;Geneva 2001, 157 Collette 1999, 198 ).

 

باکتری­های SRB نقش مهمی را در شروع التهاب یا التهاب­های دائمی از قبیل بیماری­های دندان[1] ایفا     می­کنند (;Langendijk 2000, 943-950 loubinoux et al 2003, 1304-1306 ). Desulphovibrio spp از آبسه­های شکمی و آبسه­های مغزی و همچنین از خون و ادرار نیز جدا شده­اند (Collette 1999, 198). باکتری­های SRB انرژی مورد نیاز خود را از احیای سولفات بدست می­آورند این باکتری­ها به دلیل تولیدH2s  که بجز ترکیبات سیتوتونیک[2] مهم است و یک عامل خورنده[3] می­باشد (Barton 2007, 1-523) و در مجاری دستگاه گوارش (دهان و روده) انسان و حیوانات وجود دارند. یکی از آرکی متانوژنیک (متانوژن) به نام متانو بروی باکتراسمیتی[4] در عفونت­های انسانی یافت شده است (Worden and Smelly 1996, 157-171 ) مهم ترین باکتری­های احیاکننده سولفات شناسایی شده در فلور روده عبارتند از:

 

1-4-4- تسهیم……………………………………………………………………………………………………………………………………..12

 

1-5- تولید جنین در شرایط in vitro

 

1-5-1- بلوغ آزمایشگاهی تخمک (IVM)………………………………………………………………………………………….15

 

1-5-2- ظرفیت پذیری اسپرم………………………………………………………………………………………………………………19

 

1-5-3- لقاح در شرایط آزمایشگاهی(IVF)………………………………………………………………………………………..21

 

1-5-4-کشت جنین در شرایط آزمایشگاهی(IVC)……………………………………………………………………………23

 

1-6- مقایسه جنین­های طبیعی با جنین­های آزمایشگاهی………………………………………………………………….26

 

1-7- انجماد

 

1-7-1- مراحل اصلی انجماد………………………………………………………………………………………………………………..30

 

1-7-2- راه­های کاهش اثرات زیانبار مواد محافظت کننده…………………………………………………………………..30

 

1-7-3- روش­های انجماد……………………………………………………………………………………………………………………..30

 

1-7-3-1- انجماد شیشه­ای………………………………………………………………………………………………………………….31

 

1-7-3-1-1- عوامل تکنیکی موثر در انجماد شیشه­ای……………………………………………………………………….32

 

1-7-3-1-1-1- زمان تعادل و آبگیری………………………………………………………………………………………………..32

 

1-7-3-1-1-2- سرعت سرد کردن……………………………………………………………………………………………………..32

 

1-7-3-1-1-3- سرعت گرم کردن………………………………………………………………………………………………………35

 

1-7-3-1-1-4- مواد محافظ انجمادی…………………………………………………………………………………………………35

 

1-7-3-1-1-5- نقش ضد یخ­ها……………………………………………………………………………………………………………36

 

1-7-3-1-1-6- ذوب و آبدهی…………………………………………………………………………………………………………….. 36

 

1-8- آلدوسترون…………………………………………………………………………………………………………………………………….37

 

1-8-1- خصوصیات……………………………………………………………………………………………………………………………….37

 

1-8-2- عملکرد…………………………………………………………………………………………………………………………………….38

 

1-9- ارزیابی کیفیت رویان……………………………………………………………………………………………………………………41

 

1-10- سلول­های رویانی……………………………………………………………………………………………………………………….43

 

فصل دوم: بر متون گذشته

 

2-1- اثرات انجماد بر روی تخمک………………………………………………………………………………………………………..46

 

2-2- اثر روش انجماد شیشه­ای…………………………………………………………………………………………………………….47

 

2-3- بیان زیر واحد­های پمپ Na/K ATpase در تخمک و جنین…………………………………………………48

 

2-4- پمپ  Na/K ATpase ……………………………………………………………………………………………………………49

 

2-5- آکواپورین­ها………………………………………………………………………………………………………………………………….51

 

2-6- هچ یا تفریخ………………………………………………………………………………………………………………………………….52

 

2-7- فعال شدن ژنوم رویانی………………………………………………………………………………………………………………..55

 

2-8- متابولیسم رویان…………………………………………………………………………………………………………………………..56

 

2-9- نقش آلدوسترون در بیان پروتیین Na/K ATpase………………………………………………………………..58

 

فصل سوم: مواد و روش­ها

 

3-1- تولید جنین های حاصل از لقاح خارج رحمی (IVF)

 

3-1-1- جمع‌آوری تخمدان‌ها از کشتارگاه و استحصال تخمک‌ها از مایع فولیکولی……………………………61

 

3-1-2- بلوغ آزمایشگاهی تخمک‌ها (IVM)………………..……….…….………………………………………..62

 

3-1-3- لقاح داخل آزمایشگاهی (IVF)……………………………………………………………………………………………..63

 

3-1-3-1- آماده سازی اووسیت­های بالغ شده برای لقاح…………………………………………………………………….63

 

3-1-3-2- آماده سازی اسپرم………………………………………………………………………………………………………………63

 

3-1-4- کشت داخل آزمایشگاهی جنین های حاصل از(IVF)………………………………………………………….64

 

3-1-5- تازه كردن محیط کشت جنین‌ها…………………………………………………………………………………………….65

 

3-2- تهیه محلول‌های انجمادی……………………………………………………………………………………………………………65

 

3-3- مراحل انجام روند انجماد شیشه ای…………………………………………………………………………………………….66

 

3-4- محیط ذوب…………………………………………………………………………………………………………………………………..66

 

3-5- گروه­های آزمایشی و طراحی مطالعه……………………………………………………………………………………………66

 

3-6- ارزیابی جنین‌ها

 

3-6-1- ارزیابی کیفی جنین‌ها با استفاده از رنگ‌آمیزی افتراقی………………………………………………………….68

 

3-7- ایمونوسایتوشیمی پروتئین­های سطحی جنین های گوسفندی(Sheep embryo ICC)……..70

 

فصل چهارم: نتایج

 

4-1- تخمک­های منجمد شده

 

4-1-1- گروه آزمایشی اول، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های

 

 

منجمد-ذوب شده در مرحله GV………………………………………………………………………………………………………….82

 

4-1-2- گروه آزمایشی دوم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم

 

جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های منجمد-ذوب شده…………………………….82

 

4-1-3- گروه آزمایشی سوم، افزودن آلدوسترون در طی IVM،

 

ومتعاقباً انجماد تخمک ها در مرحله MII……………………………………………………………………………………………..83

 

4-1-4- گروه آزمایشی چهارم، یا گروه کننرل……………………………………………………………………………………..83

 

4-2- تخمک های منجمد نشده

 

4-2-1- گروه آزمایشی پنجم، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های غیر منجمد……………….85

 

4-2-2- گروه آزمایشی ششم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های غیر منجمد………………………………………………………………………………………………….85

 

4-2-3- گروه آزمایشی هفتم، یا گروه کنترل……………………………………………………………………………………….86

 

4-3-

 

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

 

 

 

بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..89

 

نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 94

 

پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 95

 

منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 96

 

خلاصه انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………………..113

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

جدول 3-1- ترکیبات محیط HEPES buffered M199……………………………………………………………. 73

 

جدول 3-2- ترکیبات محیط Bicarbonate buffered M199………………………………………………….. 73

 

جدول 3-3- ترکیبات محیطIVF medium “Fert. TALP”……………………………………………………… 74

 

جدول 3-4- ترکیبات محیطRinsing medium “R. TALP”………………………………………………….. 74

 

جدول 3-5- ترکیبات محیط Sperm medium “S. TALP”……………………………………………………. 75

 

جدول 3-6- ترکیبات محیط H-SOF…………………………………………………………………………………………………. 75

 

جدول 3-7- ترکیبات محیطی IVC- SOF……………………………………………………………………………………….. 76

 

جدول 3-8- Medium A……………………………………………………………………………………………………………………… 76

 

جدول 3-9- مواد شیمیایی و تجهیزات…………………………………………………………………………………………………… 77

 

جدول 4-1- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های منجمد-ذوب شده………………………………………………83

 

جدول 4-2- حضور آلدوسترون در محیط کشت  در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های تازه……………………………………………………………………. 86

 

جدول 4-3- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی و تأثیر آن بر تعدا سلول های در تعدادی از سلول­های بلاستوسیست در تقسیم جنین­های حاصل از تخمک­های تازه………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 86

 

 

 

                                                                                       

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

نمودار 4-1- تاثیر آلدسترون روی بیان زیرواحد های α1 و β1 پمپ  ATPase سدیم

 

و پتاسیم در مدت IVM   یا  IVC – روز چهارم- در محیط کشت سلولهای

 

بلاستوسیت. نوارها با حروف مختلف نشان دهنده تفاوت معنی­دار می­باشد…………………………………………. 87

 

 

 

 

 

 

 

فهرست اشکال

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

شکل 1-1- روند انجام اووژنزیزیس و اسپرماتوژنزیس……………………………………………………………………………. 10

 

شکل 1-2- روند انجام لقاح از زمان رشد تخمک…………………………………………………………………………………… 11

 

شکل 1-3- تصاویر شماتیک مراحل نفوذ اسپرم به داخل تخمک……………………………………………………….. 21

 

شکل 1- 4- تصویر شماتیک روند تکامل جنین…………………………………………………………………………………….. 24

 

شکل 1-5- دو مکانیسم عملکرد مولکولی آلدوسترون…………………………………………………………………………… 38

 

شکل 1- 6- سیگنال های آلدوسترون……………………………………………………………………………………………………. 39

 

شکل 1-7- میزان اتصال سلول – سلول در توده سلولی رویان…………………………………………………………….. 44

 

شکل 2-1- اتصالات سلولی در رویان در حال تقسیم ونقش آنها در تشکیل حفره

 

بلاستوسل و تعیین موقعیت سلول­های ترفکتودرم و توده داخلی………………………………………………………… 50

 

شکل2-2- فرایند تشکیل حفره بلاستوسل…………………………………………………………………………………………….. 51

 

شکل2-3-  ساز وکار کنترل فرایند هچ شدن بلاستوسیست……………………………………………………………….. 53

 

شکل 2-4- پدیدۀ فعال شدن ژنوم رویانی……………………………………………………………………………………………… 56

 

شکل 3-1- رنگ آمیزی افتراقی بلاستوسیت های مشتق از تخمک های منجمد…………………………….. 69

 

شکل 3-2- رنگ آمیزی ایمونوسیتوشیمی زیر واحد های α1 و β1 پمپ Na+/K+ ATPase… 72

 

شکل 4-1- تصاویر مورولا و بلاستوسیست تولید شده در آزمایشگاه

 

جنین شناسی پژوهشگاه ابن سینا…………………………………………………………………………………………………………… 84