7-1رنگیزه های گیاهی.. 15

 

8-1جوانه زنی.. 18

 

1-8-1 عوامل درونی موثر بر جوانه زنی.. 18

 

11-1اهداف مشخص تحقیق.. 21

 

12-1سؤالات تحقیق.. 21

 

13-1فرضیه‏های تحقیق.. 22

 

14-1تعریف واژه‏ها و اصطلاحات فنی و تخصصی.. 22

 

بر تحقیقات انجام شده 24

 

1-2پیشینه ی تحقیق   24

 

فصل سوم: مواد و روشها 32

 

1-3شرح مطالعه. 32

 

2-3 مواد و وسایل مورد استفاده در این پروژه ی تحقیقاتی.. 33

 

2-3-1 ابزار 33

 

2-2-3 مواد 34

 

1-2-3 توضیحی مختصر درمورد مواد و وسایل مورداستفاده 34

 

3-3 تهیه ی بذور 35

 

4-3 استریل کردن تمام ابزار و محیط کار 35

 

5-3 تهیه ی مواد شیمیایی و مقادیر مورد نظر آنها 35

 

6-3 تهیه ی محلول ها 35

 

7-3 ضدعفونی و شستشوی بذور 37

 

8-3 ضدعفونی پتری دیش ها 37

 

شکل 4-3پتری دیش های حاوی بذور و محلول. 38

 

9-3 کاشت بذور 38

 

10-3 آبیاری و جوانه زنی بذور 38

 

11-3 اجرای آزمایش در مرحله ی گیاهچه ای.. 39

 

12-3 اندازه گیری طول ساقه چه و ریشه چه. 40

 

13-3 اندازه گیری رنگیزه های فتوسنتزی.. 41

 

فصل چهارم: نتایج  43

 

1-4 نتایج بادرنجبویه. 44

 

1-1-4جوانه زنی.. 44

 

2-1-4 طول ریشه چه. 45

 

3-1-4 طول ساقه چه. 46

 

4-1-4 کلروفیل a. 47

 

5-1-4 کلروفیل b. 48

 

6-1-4 کاروتنوئیدها 49

 

2-4 نتایج نعناع فلفلی.. 50

 

1-2-4 جوانه زنی.. 51

 

2-2-4 طول ریشه چه. 51

 

3-2-4 طول ساقه چه. 52

 

4-2-4 کلروفیل a. 53

 

5-2-4 کلروفیل b. 54

 

6-2-4 کاروتنوئیدها 55

 

3-4 نتایج سنبل الطیب.. 57

 

1-3-4 جوانه زنی.. 57

 

2-3-4 طول ریشه چه. 58

 

3-3-4 طول ساقه چه. 59

 

4-3-4 کلروفیل a. 60

 

5-3-4 کلروفیل b. 61

 

6-3-4 کاروتنوئیدها 62

 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری   64

 

1-5 بحث.. 64

 

2-5 نتایج بادرنجبویه. 66

 

1-2-5 جوانه زنی.. 66

 

 

2-2-5 طول ریشه چه. 67

 

3-2-5 طول ساقه چه. 68

 

4-2-5 کلروفیل a و b. 69

 

5-2-5 کاروتنوئیدها 69

 

3-5 نتایج نعناع فلفلی.. 71

 

1-3-5 جوانه زنی.. 71

 

2-3-5 طول ریشه چه. 71

 

3-3-5 طول ساقه چه. 72

 

4-3-5 کلروفیل a و b. 72

 

5-3-5 کاروتنوئیدها 73

 

4-5 نتایج سنبل الطیب.. 75

 

1-4-5 جوانه زنی.. 75

 

2-4-5 طول ریشه چه. 76

 

3-4-5 طول ساقه چه. 76

 

4-4-5 کلروفیل a و b. 77

 

5-4-5 کاروتنوئیدها 77

 

5-5 نتیجه گیری.. 78

 

پیشنهادات. 80

 

منابع  أ‌

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جدول

 

جدول 1-3 ابزار مورد استفاده در تحقیق                                                                     33

 

جدول 2-3 مواد مورد استفاده در تحقیق                                                                     34

 

جدول 1-4آنالیز نتایج بادرنجبویه                                                                                                  44

 

جدول 2-4 آنالیز نتایج نعناع فلفلی                                                                          50

 

جدول 3-4 آنالیز نتایج سنبل الطیب                                                                          57

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها و تصاویر

 

 

 

شکل 1-3دستگاه اولتراسونیک                                                                                                        36

 

شکل 2-3ستگاه اولتراسونیک و حل کردن نانوذرات تیتانیوم دی اکسید در آب                                           36

 

شکل 3-3دستگاه اولتراسونیک و حل کردن  تیتانیوم دی اکسید در آب                                                     37

 

شکل 4-3پتری دیش های حاوی بذور و محلول                                                                                  38

 

شکل 5-3 جوانه زنی بذور                                                                                                             39

 

شکل 6-3 کشت گلدانی                                                                                                                40

 

شکل 7-3 اندازه گیری طول ریشه چه و ساقه چه                                                                                41

 

شکل 8-3 اندازه گیری رنگیزه های فتوسنتزی                                                                                     42

 

 

 

فهرست نمودارها

 

نمودار1-4- اثر تیتانیوم و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید دی اکسید بر جوانه زنی بادرنجبویه                             45

 

نمودار2-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر طول ریشه چه ی بادرنجبویه                     46      نمودار3-4- اثرتیتانیوم دی اکسید و  نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر طول ساقه چه ی بادرنجبویه                            47

 

نمودار4-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل a بادرنجبویه                            48

 

نمودار5-4- اثر تیتانیوم دی اکسید  و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل b بادرنجبویه                             49

 

نمودار6-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کاروتنوئید بادرنجبویه                             50

 

نمودار7-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر جوانه زنی نعناع فلفلی                              51

 

نمودار8-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر طول ریشه چه ی نعناع فلفلی                  52

 

نمودار9-4-  اثر تیتانیوم دی اکسید‌ونانوذره ی تیتانیوم دی اکسیدبرطول ساقه چه‌ی نعناع فلفلی                          53

 

نمودار10-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل a نعناع فلفلی                         54

 

نمودار11-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کلروفیل b نعناع فلفلی                         55

 

نمودار12-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر کاروتنوئید نعناع فلفلی                         56

 

نمودار13-4- اثر تیتانیوم دی اکسید و نانوذره ی تیتانیوم دی اکسید بر جوانه زنی سنبل الطیب                         58

 

1 -5-3- سیگار……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………10

 

1-5-4- فاکتورهای ژنتیکی…………………………………………………………………………………………………………………………………………11

 

1-6- مخاط معده…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….12

 

1-7- موکوس معده…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………12

 

1-8- پروتئین های گاستروکین …………………………………………………………………………………………………………………………………….13

 

1-8-1- ژن GKN1 …………………………………………………………………………………………………………………………………………………….15

 

1-8-2-نقش GKN1 در معده و سرطان معده…………………………………………………………………………………………………………..16

 

1-9- ارتباط پلی مورفیسم‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ ژنتیکی با خطر ابتلا به سرطان…………………………………………………………………………………..18

 

1-10- اهداف تحقیق…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….20

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فصل دوم:پیشینه تحقیق

 

فصل سوم:مواد و روش ها

 

3-1- وسایل و مواد مورد استفاده در این مطالعه…………………………………………………………………………………………………………..24

 

3-2- نوع مطالعه……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..26

 

3-3- جامعه آماری و نمونه گیری………………………………………………………………………………………………………………… ………………26

 

3-4- رضایت نامه…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….27

 

3-5- روش تهیه محلول‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مورد نیاز جهت انجام الکتروفورز……………………………………………………………………………………..27

 

3-5-1-روش تهیه بافر الکتروفورز TBE در حجم 500 میلی لیتر……………………………………………………………………………..27

 

3-5-2- محلول رنگ آمیزی DNA Stain ………………………………………………………………………………………………………………….28

 

3-6- استخراج DNA از خون………………………………………………………………………………………………………………………………………….28

 

3-7- تهیه ژل آگارز و الکتروفورز…………………………………………………………………………………………………………………………………….29

 

3-8- طراحی پرایمر…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………30

 

3-9- تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1……………………………………………………………..………………………………………………………. 31

 

3-10- توالی یابی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..35

 

3-11- شناسایی SNPهای پروموتر ژن GKN1 …………………………………………………………………………………………………………….35

 

3-12- تکنیک  Tetra Primer ARMS- PCR………………………………………………………………………………………………………………..35

 

3-13- تعیین ژنوتیپ  SNP با شناسه های rs4575760  و rs4072127 با روش Tetra- primer ARMS PCR…………37

 

3-14- آنالیز آماری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….42

 

پرسشنامه………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….43

 

فصل چهارم-نتایج

 

4-1- مشخصات جمعیت مورد مطالعه…………………………………………………………………………………………………………………………44

 

4-2- بررسی ارتباط فاکتورهای خطر با سرطان معده………………………………………………………………………………………………….47

 

4-2-1- عفونت هلیکوباکتر پیلوری…………………………………………………………………………………………………………………………..47

 

4-2-2- مصرف الکل…………………………………………………………………………………………………………………………………………………..48

 

4-2-3- ازدواج فامیلی والدین……………………………………………………………………………………………………………………………………49

 

4-2-4- سابقه سرطان در خانواذه……………………………………………………………………………………………………………………………..51

 

4-3- بررسی کیفیت DNA استخراج شده…………………………………………………………………………………………………………………..51

 

4-4- تکثیر ناحیه پروموتری ژن‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ GKN1……………………………………………………………………………………………………………………..52

 

4-5- شناساییSNP  های ناحیه پروموتری ژن GKN1………………………………………………………………………………………………53

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4-6- تعیین ژنوتیپ  SNPبا شناسه‌های rs4575760 وrs4072127  با تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR………55

 

4-7- بررسی ارتباط پلی مورفیسم rs 4575760  ژنGKN1  با خطر ابتلا به سرطان معده……………………………………….58

 

4-8– بررسی ارتباط پلی مورفیسم rs 4072127 ژن GKN1 با خطر ابتلا به سرطان معده……………………………………….58

 

4-9- بررسی ارتباط پلی مورفیسم‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ ژنGKN1   با نوع تومور………………………………………………………………………………..60

 

فصل پنجم-بحث و نتیجه گیری

 

5-1- عوامل موثر در ابتلا به سرطان معده…………………………………………………………………………………………………………………62

 

5-1-1- بررسی نتایج حاصل از اثر عفونت هلیکوباکتر پیلوری بر ابتلا به سرطان معده………………………………………….63

 

5-1-2- بررسی نتایج حاصل از تاثیر الکل با خطر ابتلا به سرطان معده…………………………………………………………………63

 

5-1-3- سابقه سرطان در خانواده (اقوام درجه یک)……………………………………………………………………………………………….64

 

5-1-4- نتایج حاصل از بررسی ارتباط پلی مورفیسم‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ تک نوکلئوتیدی پروموتر ژن GKN1 با خطر ابتلا به سرطان

 

معده………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………65

 

پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………67

 

رفرنس…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….68

 

چکیده خارجی……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….78

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها

 

شکل 1-1-قسمت‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مختلف معده……………………………………………………………………………………………………………………………..4

 

شکل 1- 2- ترکیبات تشکیل دهنده موکوس……………………………………………………………………………………………………………..12

 

شکل1 – 3- ساختار فضایی پروتئین های گاستروکین……………………………………………………………………………………………….14

 

شکل 1-4- بیان GKN_S، TFF_S و موسین‌ها در اپیتلیوم معده موش………………………………………………………………………….14

 

شکل 1-5- جایگاه ژن‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ GKN1، GKN2 و GKN3 بر روی کروموزوم 2 انسان…………………………………………………..15

 

شکل 1-6- موقعیت 38CYS در 3 ژنGKN1، GKN2 و GKN3……………………………………………………………………………16

 

شکل 3-1: نمایی از تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR……………………………………………………………………………………….36

 

شکل 4-1: الکتروفورز DNA استخراج شده بر روی ژل آگارز 1 درصد. …………………………………………………………………..51

 

شکل 4-2:   تکثیر بخشی از ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1A)……………………………………………………………………..52

 

شکل 4-3: تکثیر بخشی از ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1B)………………………………………………………………………..53

 

شکل 4-4 : مقایسه توالی ناحیه پروموتر ژن GKN1 با نرم افزار SeqMan ………………………………………………………………54

 

شکل 4-5: ژنوتیپ‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مختلف در SNP  rs 4557760 در پروموتر ژن GKN1………………………………………………………..54

 

شکل4-6 :ژنوتیپ‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ مختلف در SNP 72127  rs 40 در پروموتر ژن GKN1 ……………………………………………………….55

 

شکل4-7: تعیین ژنوتیپ SNP با شناسه 4557760  rs ژن GKN1 با تکنیک Tetra Primer ARMS- PCR………..56

 

شکل4- 8: تعیین ژنوتیپ SNP با شناسه 4072127  rsژن GKN1 با تکنیک  .Tetra Primer ARMS- PCR………57

 

شکل 5-1: نواحی پروموتری ژن‌های GKN2، TFF1، TFF2 و TFF3 و فاکتورهای رونویسی مربوط به این ژن‌ها….67

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

جدول 1-1– خلاصه ای از پلی مورفیسم‌ها‌یی که با انواع منتشر و روده ای سرطان معده در ارتباط هستند……………19

 

جدول 3-1- توالی پرایمرهای GKN1A و GKN1B…………………………………………………………………………………………………….32

 

جدول 3-2- شرایط PCR جهت تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1 (GKN1A و GKN1B )…………………………………..33

 

جدول 3-3- میزان مواد مورد نیاز PCR جهت تکثیر ناحیه پروموتری ژن GKN1…………………………………………………….34

 

جدول 3-5- توالی پرایمرهای مورد استفاده در Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4575760……..37

 

جدول 3-6- توالی پرایمرهای مورد استفاده در Tetra- primer ARMS PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4072127……..38

 

جدول 3-7- مواد و حجم مورد نیاز برای انجام Tetra- primer ARMS PCR  برای تعیین ژنوتیپrs 4575760 ……39           جدول 3-8- مواد و حجم مورد نیاز برای انجام Tetra- primer ARMS PCR  برای تعیین ژنوتیپ rs 4072127 ….40          جدول3-9- شرایط PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4575760…………………………….. …………………………..41       جدول3-10- شرایط PCR برای تعیین ژنوتیپ rs4072127………………………………………………………………………………………41        جدول4-1: مشخصات نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های جمعیت A……………………………………………………………………………………………………………….45

 

جدول4-2: مشخصات نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ جمعیت B……………………………………………………………………………………………………………….46

 

جدول 4-3: ژنوتیپ نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ بیمار و شاهد پلی‌مورفیسم rs 4557760 ………………………………………………………………….59

 

جدول 4-4: ژنوتیپ نمونه‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌ بیمار و شاهد پلی مورفیسم rs 4072127 ………………………………………………………………..59

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

نمودار4-1- فراوانی سرطان های Intestinal (19 نفر)و diffuse (12 نفر) در بیماران آلوده به هلیکوباکتر پیلوری در

 

جمعیت A……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..47

 

نمودار 4-2- فراوانی سرطان های Intestinal (17 نفر) و diffuse (11 نفر) در مبتلایان به هلیکوباکتر پیلوریدر

 

جمعیت B…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….48

 

نمودار4-3: فراوانی افراد الکلی و غیر الکلی در گروه بیمار و شاهد در جمعیت A……………………………………………………49

 

1-6- علایم خارج شدن توازن باکتری­های روده.. 13

 

1-7- پروبیوتیک­ها.. 13

 

1-8- منافع مصرف پروبیوتیک­ها.. 13

 

1-9- اشکال پروبیوتیک­ها.. 14

 

1-10- پری بیوتیک­ها.. 14

 

1-11- باکتری­های بی­هوازی احیاکننده سولفات.. 15

 

1-12- نقش باکتری­های احیا کننده سولفات در طبیعت.. 15

 

1-13- نقش باکتری­های احیا کننده سولفات  در صنعت نفت.. 16

 

1-14- خوردگی میکروبی.. 16

 

1-15- واکنش­های احیای ترموشیمیایی سولفات.. 17

 

1-16-  سیستم­های آلوده به SRB.. 17

 

1-17- اهداف، فرضیات و پرسش اصلی پژوهش.. 18

 

1-17-1 اهداف اصلی.. 18

 

1-17-2 اهداف اختصاصی.. 18

 

1-17-3 اهداف کاربردی.. 18

 

1-17-4 فرضیات پژوهش.. 18

 

1-17-5 پرسش اصلی پژوهش.. 18

 

فصل دوم: پیشینه پژوهش

 

2-1- پژوهش­های انجام گرفته در سطح جهان.. 20

 

2-2- پژوهش­های انجام گرفته در ایران.. 23

 

فصل سوم: روش شناسی تحقیق

 

3-1- مواد و روش کار.. 25

 

3-2- محیط کشت مورد نیاز.. 26

 

3-3- انتخاب بیماران مورد نظر برای نمونه­برداری.. 26

 

3-4- ارزیابی تاثیر آنتی بیوتیک ها برروی باکتری­های  SRB.. 30

 

3-4-1 آنتی بیوتیک کلیندامایسین.. 30

 

3-4-2 آنتی بیوتیک جنتامایسین.. 31

 

3-4-3 آنتی بیوتیک مترونیدازول.. 31

 

3-5- ارزیابی خواص ضدمیکروبی آنتی بیوتیک­ها بر باکتری­های SRB مثبت   32

 

3-6- تعیین هویت مولکولی باکتری­های SRB مثبت.. 33

 

3-7- آنالیز آماری.. 33

 

 

 

 

 

فصل چهارم: نتایج یافته های تحقیق

 

4-1- مقدمه.. 35

 

4-2- تجزیه و تحلیل نتایج جمعیت شناختی.. 35

 

4-2-1 جنسیت.. 36

 

4-2-2 سن.. 37

 

4-2-3 میزان تحصیلات.. 38

 

4-2-4 میزان درآمد.. 39

 

4-3- ارزیابی فرضیات پژوهش.. 40

 

4-3-1 فرضیه اول.. 40

 

4-3-2 فرضیه دوم.. 43

 

4-3-3 فرضیه سوم.. 45

 

4-3-4 فرضیه چهارم.. 47

 

4-3-5 فرضیه پنجم.. 48

 

4-3-6 فرضیه ششم.. 50

 

4-4- نتایج آزمایش  PCR.. 54

 

.. 54

 

4-4-2 تأیید PCR ژن16S rRNA.. 55

 

4-4-3 توالی تعیین ترادف شده قطعه 16S rRNA.. 56

 

4-4-4 آنالیز فیلوژنتیکی.. 57

 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

otif.ir/پایان-نامه-بررسی-باکتری-های-احیاء-کنند/

 

5-1- بحث.. 63

 

5-2- نتیجه گیری.. 67

 

5-3- پیشنهادات.. 67

 

منابع و مآخذ.. 68

 

فهرست منابع فارسی.. 68

 

فهرست منابع انگلیسی.. 70

 

چکیده انگلیسی.. 73

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

جدول 3-1: پرسشنامه مورد استفاده در این پژوهش. 25

 

جدول 3-2: ترکیبات محیط کشت API 26

 

جدول 3-3: خصوصیات بالینی افراد انتخاب شده برای نمونه­برداری   28

 

جدول 4-1: توزیع فراوانی و افراد بر حسب جنسیت. 36

 

جدول 4-2: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب گروههای سنی. 37

 

جدول 4-3: توزیع فراوانی و در پاسخ دهندگان بر حسب میزان تحصیلات   38

 

جدول 4-4: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب میزان درآمد   39

 

جدول 4-5: فراوانی افراد مورد پژوهش بر حسب گروه های سنی و بیماری   40

 

جدول 4-6: ضریب همبستگی متغیرهای سن افراد و بیماری. 42

 

جدول 4-7: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس درامد و بیماری   43

 

جدول 4-8: ضریب همبستگی متغیرهای سن افراد و بیماری. 44

 

جدول 4-9: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری   45

 

جدول 4-10: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس جنسیت و سابقه مصرف آنتی­بیوتیک. 47

 

جدول 4-11: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه سنی و تحصیلات   48

 

جدول 4-12: ضریب همبستگی متغیرهای تحصیلات افراد و بیماری   49

 

جدول 4-13: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه های سنی وتاثیر آنتی­بیوتیک­ها. 50

 

جدول 4-14: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی. 51

 

جدول 4-15: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی جنتامایسین   52

 

جدول 4-16: ضریب همبستگی متغیرهای سن و تاثیر داروی مترونیدازول   53

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

نمودار 4-1: فراوانی و نسبت افراد مورد پژوهش بر حسب جنس   36

 

نمودار 4-2: توزیع درصد نمونه آماری افراد برحسب سن. 36

 

نمودار 4-3: فراوانی افراد مورد پژوهش  بر حسب میزان تحصیلات   38

 

نمودار 4-4: توزیع در صد نمونه آماری افراد  بر حسب میزان درآمد   39

 

نمودار 4-5: نمودار توافقی سن و بیماری آپاندیسیت. 41

 

نمودار 4-6: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس آپاندیسیت   41

 

نمودار 4-7: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس درامد و بیماری   43

 

نمودار 4-8: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری آپاندیسیت. 46

 

نمودار 4-9: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس سابقه بیماری و بیماری عفونت روده. 46

 

نمودار 4-10: فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس جنسیت و سابقه مصرف آنتی­بیوتیک. 47

 

نمودار 4-11:  فراوانی افراد مورد پژوهش بر اساس گروه سنی و تحصیلات   48

 

نمودا 4-12: ارزیابی تاثیر کیفی داروی کلیندامایسین بر باکتری­های احیا کننده سولفات جدا شده از گروه­های سنی. 51

 

نمودار 4-13: ارزیابی تاثیر کیفی داروی جنتامایسین بر باکتری های احیا کننده سولفات جدا شده از گروه های سنی. 52

 

نمودار 4-14: ارزیابی تاثیر کیفی داروی مترونیدازول بر باکتری­های احیا کننده سولفات  جدا شده از گروه­های سنی. 53

 

 

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

شکل 1-1: آپاندیس ملتهب و متورم (آپاندیسیت).. 6

 

شکل 1-2: فلور طبیعی روده.. 10

 

شکل 3-1: مرحله جداکردن زائده آپاندیس.. 27

 

شکل 3-2: تلقیح باکتری­های SRB)) به محیط مایع API. 30

 

شکل 3-3: تاثیر آنتی بیوتیک­ها بر رشد باکتری های SRB.. 32

 

شکل 4-1: تصویر الکتروفورز حاصل از DNA استخراج شده از باکتری.   54

 

شکل 4-2: تصویر الکتروفورز حاصل از تکثیر ژن 16S rRNA باکتری.   55

 

 

 

 

 

 

 

 چکیده

 

باکتری­های احیا کننده سولفات (SRB) گروه بزرگی از میکروارگانیسم­های بی­هوازی هستند که نقش بسیار مهمی در بسیاری از فرآیندهای بیوژئوشیمیایی ایفا می­کنند. این پژوهش با هدف شناسایی وتعیین هویت مولکولی باکتری­های احیا کننده سولفات و نقش آن­ها در عفونت­های روده بزرگ و آپاندیسیت در شهر کرمان انجام شد. روش کار: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی در سال 1391 تا 1392 بر روی 50 بیمار مراجعه کننده به بیمارستان­های مختلف شهر کرمان انجام شد. تمامی افراد مورد بررسی دارای مشکلات عفونت روده بزرگ ویا آپاندیسیت بودند. در بین این افراد نمونه­گیری از حفره شکم و روده ی بزرگ انجام شد. سپس نمونه­های تهیه شده به محیط کشت اختصاصی API تلقیح و 2 ماه در دمای 35 درجه سانتی گراد گرماگذاری شدند. سپس نمونه­های مثبت پس از کشت مجدد در محیط جامد اختصاصیSRB ، برای خالص سازی بیشتر به محیط جدید API  منتقل گردید. شناسایی مولکولی جدایه ها با استفاده از پرایمر یونیورسال  16s rRNA و مقاومت آنتی بیوتیکی صورت گرفت. از مجموع نمونه­های مورد پژوهش از6 مورد (12%) نمونه­های مشکوک به SRB جداسازی گردید. اما با روش مولکولی در4 مورد (8%) باکتری های احیا کننده سولفات شناسایی شد. بیشترین گونه ی باکتری­های (SRB) مربوط به سویه Desulfovibrio piger بود. همچنین بین جداسازی باکتری­های SRB، سن و میزان تحصیلات افراد ارتباط معنی­داری مشاهده شد مناسب­ترین آنتی­بیوتیک برای حذف باکتری­های SRB کلیندامایسین شناسایی شد. با توجه به نقش احتمالی باکتری­های SRB در  ایجاد سرطان کلون و عفونت­های روده­ای، ضرورت انجام پژوهش­های تکمیلی و پایش مداوم بالینی در جمعیت­های گسترده تر و ارزیابی نقش بیوسایدها وآنتی­بیوتیک­ها در حذف این باکتری­ها وجود دارد.

 

 

 

واژگان کلیدی: باکتری­های احیا کننده سولفات، عفونت­های روده بزرگ، 16s rRNA

 

مقدمه

 

باکتری­های احیا کننده سولفات SRB به طور وسیعی در اقیانوس، آب­های شیرین، لجن­ها پراکنده­اند. این باکتری­ها از سولفات به عنوان پذیرنده نهایی الکترون استفاده و سولفید هیدروژن تولید می­نمایند. تا اکنون 14 جنس از این گروه باکتری­ها شناخته شده که به جز دسولفونما ویبرو تمامی آن­ها گرم منفی می­باشند. یک جنس از این باکتری­ها به نام دسولفوویبرو می­تواند در هنگام تکثیر فعال خود بیش از 10 گرم در لیتر سولفید هیدروژن تولید نماید (آبیارد 1382، 12-11؛ ;Geneva 2001, 157 Collette 1999, 198 ).

 

باکتری­های SRB نقش مهمی را در شروع التهاب یا التهاب­های دائمی از قبیل بیماری­های دندان[1] ایفا     می­کنند (;Langendijk 2000, 943-950 loubinoux et al 2003, 1304-1306 ). Desulphovibrio spp از آبسه­های شکمی و آبسه­های مغزی و همچنین از خون و ادرار نیز جدا شده­اند (Collette 1999, 198). باکتری­های SRB انرژی مورد نیاز خود را از احیای سولفات بدست می­آورند این باکتری­ها به دلیل تولیدH2s  که بجز ترکیبات سیتوتونیک[2] مهم است و یک عامل خورنده[3] می­باشد (Barton 2007, 1-523) و در مجاری دستگاه گوارش (دهان و روده) انسان و حیوانات وجود دارند. یکی از آرکی متانوژنیک (متانوژن) به نام متانو بروی باکتراسمیتی[4] در عفونت­های انسانی یافت شده است (Worden and Smelly 1996, 157-171 ) مهم ترین باکتری­های احیاکننده سولفات شناسایی شده در فلور روده عبارتند از:

 

1-4-4- تسهیم……………………………………………………………………………………………………………………………………..12

 

1-5- تولید جنین در شرایط in vitro

 

1-5-1- بلوغ آزمایشگاهی تخمک (IVM)………………………………………………………………………………………….15

 

1-5-2- ظرفیت پذیری اسپرم………………………………………………………………………………………………………………19

 

1-5-3- لقاح در شرایط آزمایشگاهی(IVF)………………………………………………………………………………………..21

 

1-5-4-کشت جنین در شرایط آزمایشگاهی(IVC)……………………………………………………………………………23

 

1-6- مقایسه جنین­های طبیعی با جنین­های آزمایشگاهی………………………………………………………………….26

 

1-7- انجماد

 

1-7-1- مراحل اصلی انجماد………………………………………………………………………………………………………………..30

 

1-7-2- راه­های کاهش اثرات زیانبار مواد محافظت کننده…………………………………………………………………..30

 

1-7-3- روش­های انجماد……………………………………………………………………………………………………………………..30

 

1-7-3-1- انجماد شیشه­ای………………………………………………………………………………………………………………….31

 

1-7-3-1-1- عوامل تکنیکی موثر در انجماد شیشه­ای……………………………………………………………………….32

 

1-7-3-1-1-1- زمان تعادل و آبگیری………………………………………………………………………………………………..32

 

1-7-3-1-1-2- سرعت سرد کردن……………………………………………………………………………………………………..32

 

1-7-3-1-1-3- سرعت گرم کردن………………………………………………………………………………………………………35

 

1-7-3-1-1-4- مواد محافظ انجمادی…………………………………………………………………………………………………35

 

1-7-3-1-1-5- نقش ضد یخ­ها……………………………………………………………………………………………………………36

 

1-7-3-1-1-6- ذوب و آبدهی…………………………………………………………………………………………………………….. 36

 

1-8- آلدوسترون…………………………………………………………………………………………………………………………………….37

 

1-8-1- خصوصیات……………………………………………………………………………………………………………………………….37

 

1-8-2- عملکرد…………………………………………………………………………………………………………………………………….38

 

1-9- ارزیابی کیفیت رویان……………………………………………………………………………………………………………………41

 

1-10- سلول­های رویانی……………………………………………………………………………………………………………………….43

 

فصل دوم: بر متون گذشته

 

2-1- اثرات انجماد بر روی تخمک………………………………………………………………………………………………………..46

 

2-2- اثر روش انجماد شیشه­ای…………………………………………………………………………………………………………….47

 

2-3- بیان زیر واحد­های پمپ Na/K ATpase در تخمک و جنین…………………………………………………48

 

2-4- پمپ  Na/K ATpase ……………………………………………………………………………………………………………49

 

2-5- آکواپورین­ها………………………………………………………………………………………………………………………………….51

 

2-6- هچ یا تفریخ………………………………………………………………………………………………………………………………….52

 

2-7- فعال شدن ژنوم رویانی………………………………………………………………………………………………………………..55

 

2-8- متابولیسم رویان…………………………………………………………………………………………………………………………..56

 

2-9- نقش آلدوسترون در بیان پروتیین Na/K ATpase………………………………………………………………..58

 

فصل سوم: مواد و روش­ها

 

3-1- تولید جنین های حاصل از لقاح خارج رحمی (IVF)

 

3-1-1- جمع‌آوری تخمدان‌ها از کشتارگاه و استحصال تخمک‌ها از مایع فولیکولی……………………………61

 

3-1-2- بلوغ آزمایشگاهی تخمک‌ها (IVM)………………..……….…….………………………………………..62

 

3-1-3- لقاح داخل آزمایشگاهی (IVF)……………………………………………………………………………………………..63

 

3-1-3-1- آماده سازی اووسیت­های بالغ شده برای لقاح…………………………………………………………………….63

 

3-1-3-2- آماده سازی اسپرم………………………………………………………………………………………………………………63

 

3-1-4- کشت داخل آزمایشگاهی جنین های حاصل از(IVF)………………………………………………………….64

 

3-1-5- تازه كردن محیط کشت جنین‌ها…………………………………………………………………………………………….65

 

3-2- تهیه محلول‌های انجمادی……………………………………………………………………………………………………………65

 

3-3- مراحل انجام روند انجماد شیشه ای…………………………………………………………………………………………….66

 

3-4- محیط ذوب…………………………………………………………………………………………………………………………………..66

 

3-5- گروه­های آزمایشی و طراحی مطالعه……………………………………………………………………………………………66

 

3-6- ارزیابی جنین‌ها

 

3-6-1- ارزیابی کیفی جنین‌ها با استفاده از رنگ‌آمیزی افتراقی………………………………………………………….68

 

3-7- ایمونوسایتوشیمی پروتئین­های سطحی جنین های گوسفندی(Sheep embryo ICC)……..70

 

فصل چهارم: نتایج

 

4-1- تخمک­های منجمد شده

 

4-1-1- گروه آزمایشی اول، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های

 

 

منجمد-ذوب شده در مرحله GV………………………………………………………………………………………………………….82

 

4-1-2- گروه آزمایشی دوم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم

 

جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های منجمد-ذوب شده…………………………….82

 

4-1-3- گروه آزمایشی سوم، افزودن آلدوسترون در طی IVM،

 

ومتعاقباً انجماد تخمک ها در مرحله MII……………………………………………………………………………………………..83

 

4-1-4- گروه آزمایشی چهارم، یا گروه کننرل……………………………………………………………………………………..83

 

4-2- تخمک های منجمد نشده

 

4-2-1- گروه آزمایشی پنجم، افزودن آلدوسترون به محیط IVM تخمک­های غیر منجمد……………….85

 

4-2-2- گروه آزمایشی ششم، افزودن آلدوسترون در روز چهارم جنینی (D4)، به محیط کشت جنین­های حاصل از تخمک­های غیر منجمد………………………………………………………………………………………………….85

 

4-2-3- گروه آزمایشی هفتم، یا گروه کنترل……………………………………………………………………………………….86

 

4-3-

 

فصل پنجم: بحث و پیشنهادات

 

 

 

بحث………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..89

 

نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 94

 

پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 95

 

منابع………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 96

 

خلاصه انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………………..113

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

جدول 3-1- ترکیبات محیط HEPES buffered M199……………………………………………………………. 73

 

جدول 3-2- ترکیبات محیط Bicarbonate buffered M199………………………………………………….. 73

 

جدول 3-3- ترکیبات محیطIVF medium “Fert. TALP”……………………………………………………… 74

 

جدول 3-4- ترکیبات محیطRinsing medium “R. TALP”………………………………………………….. 74

 

جدول 3-5- ترکیبات محیط Sperm medium “S. TALP”……………………………………………………. 75

 

جدول 3-6- ترکیبات محیط H-SOF…………………………………………………………………………………………………. 75

 

جدول 3-7- ترکیبات محیطی IVC- SOF……………………………………………………………………………………….. 76

 

جدول 3-8- Medium A……………………………………………………………………………………………………………………… 76

 

جدول 3-9- مواد شیمیایی و تجهیزات…………………………………………………………………………………………………… 77

 

جدول 4-1- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های منجمد-ذوب شده………………………………………………83

 

جدول 4-2- حضور آلدوسترون در محیط کشت  در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی، در تکامل جنین حاصل از تخمک های تازه……………………………………………………………………. 86

 

جدول 4-3- حضور آلدوسترون در محیط کشت در زمانIVM  یا روز چهارم

 

کشت جنینی و تأثیر آن بر تعدا سلول های در تعدادی از سلول­های بلاستوسیست در تقسیم جنین­های حاصل از تخمک­های تازه………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………. 86

 

 

 

                                                                                       

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

نمودار 4-1- تاثیر آلدسترون روی بیان زیرواحد های α1 و β1 پمپ  ATPase سدیم

 

و پتاسیم در مدت IVM   یا  IVC – روز چهارم- در محیط کشت سلولهای

 

بلاستوسیت. نوارها با حروف مختلف نشان دهنده تفاوت معنی­دار می­باشد…………………………………………. 87

 

 

 

 

 

 

 

فهرست اشکال

 

عنوان                                                                                                    صفحه

 

شکل 1-1- روند انجام اووژنزیزیس و اسپرماتوژنزیس……………………………………………………………………………. 10

 

شکل 1-2- روند انجام لقاح از زمان رشد تخمک…………………………………………………………………………………… 11

 

شکل 1-3- تصاویر شماتیک مراحل نفوذ اسپرم به داخل تخمک……………………………………………………….. 21

 

شکل 1- 4- تصویر شماتیک روند تکامل جنین…………………………………………………………………………………….. 24

 

شکل 1-5- دو مکانیسم عملکرد مولکولی آلدوسترون…………………………………………………………………………… 38

 

شکل 1- 6- سیگنال های آلدوسترون……………………………………………………………………………………………………. 39

 

شکل 1-7- میزان اتصال سلول – سلول در توده سلولی رویان…………………………………………………………….. 44

 

شکل 2-1- اتصالات سلولی در رویان در حال تقسیم ونقش آنها در تشکیل حفره

 

بلاستوسل و تعیین موقعیت سلول­های ترفکتودرم و توده داخلی………………………………………………………… 50

 

شکل2-2- فرایند تشکیل حفره بلاستوسل…………………………………………………………………………………………….. 51

 

شکل2-3-  ساز وکار کنترل فرایند هچ شدن بلاستوسیست……………………………………………………………….. 53

 

شکل 2-4- پدیدۀ فعال شدن ژنوم رویانی……………………………………………………………………………………………… 56

 

شکل 3-1- رنگ آمیزی افتراقی بلاستوسیت های مشتق از تخمک های منجمد…………………………….. 69

 

شکل 3-2- رنگ آمیزی ایمونوسیتوشیمی زیر واحد های α1 و β1 پمپ Na+/K+ ATPase… 72

 

شکل 4-1- تصاویر مورولا و بلاستوسیست تولید شده در آزمایشگاه

 

جنین شناسی پژوهشگاه ابن سینا…………………………………………………………………………………………………………… 84

 

1-5-4 مكانیسم های انحلال فسفر توسط میکروارگانیسم ها. 12

 

1-6- اثر میكروارگانیسم های ریزوسفری بر گیاهان. 14

 

1-7- کودهای کشاورزی. 17

 

1-7-1 مقایسه انواع مختلف کودها. 17

 

1-7-2 کود زیستی (Biofertilizer) 18

 

1-7-3 دسته بندی کودهای زیستی. 19

 

1-7-4 اثرات سوء کودهای شیمیایی. 19

 

1-7-5 دلایل اهمیت استفاده از کودهای زیستی. 20

 

1-7-5-1 اهمیت کودهای بیولوژیک در سلامتی انسان. 21

 

1-8- پیشینه استفاده از کودهای زیستی. 22

 

1-9- جایگاه تولید كودهای زیستی در ایران و جهان. 23

 

1-10- تولید کودهای زیستی. 25

 

1-10-1 ویژگی ماده حامل. 26

 

1-11- کودهای زیستی باکتریایی. 27

 

1-12- کودهای زیستی فسفاته. 28

 

1-13- لیگنیت. 29

 

1-14- ویژگی های گیاه تربچه. 30

 

1-14-1 خصوصیات گیاه شناسی. 30

 

1-14-2 شرایط اقلیمی. 31

 

1-14-3 کشت تربچه. 33

 

1-15- اهداف تحقیق. 34

 

1-16- فرضیه های تحقیق. 34

 

فصل دوم: بر ادبیات و پیشینه تحقیق

 

2-1- پیشینه تحقیق. 36

 

2-2- هدف پژوهش. 40

 

فصل سوم: روش اجرای تحقیق

 

3-1- تهیه کشت جوان و اطمینان از خالص بودن سویه نگهداری شده   42

 

3-1-1 رنگ آمیزی گرم. 42

 

3-1-2 تکنیک کاور اسلیپ. 42

 

3-2- پیش تست سویه مورد نظر برای اطمینان مجدد از انحلال فسفات در مقیاس آزمایشگاهی. 43

 

3-3- ارزیابی به کارگیری افزودنی­های لازم برای افزایش بقا سویه مورد نظر نسبت به تنش های محیطی مشتمل بر خشکی، شوری، دما، UV، pH    44

 

3-3-1 آماده سازی ماده حامل جهت تلقیح با باکتری. 44

 

3-3-2 اعمال تنش های محیطی بر روی تیمارها. 45

 

3-3-2-1 محیط کشت استارچ کازئین آگار. 46

 

3-3-2-2 محلول  كدورت سنجی مك فارلند. 46

 

3-3-2-3 محلول رقیق كننده. 47

 

3-4- اعمال بهترین تیمار به گلدان ها و بررسی پایداری باکتری در ریزوسفر گیاه تربچه. 47

 

3-4-1 روش كشت گلدانی تربچه. 47

 

3-5- تاثیر سطوح مختلف تلقیح بر روی بقاء در سطح بذر تربچه   48

 

3-6- تاثیر سطوح مختلف تلقیح به کار برده شده در جذب فسفات توسط گیاه تربچه. 48

 

3-6-1 اندازه گیری غلظت فسفر گیاه تربچه. 48

 

3-6-2 روش ساخت معرف وانادات – مولیبدات. 49

 

3-6-3 روش تهیه محلول های استاندارد فسفر و رسم منحنی استاندارد   49

 

3-7- بررسی بقاء باکتری در حامل‏های مختلف. 50

 

3-8- نگهداری سویه مورد نظر برای مطالعات بعدی. 50

 

3-8-1 محیط كشت نوترینت براث (Nutrient Broth) 51

 

3-8-2 محیط كشت TSA.. 51

 

3-9- نتایج آنالیز خاک گلدان قبل از آزمون و پس از آزمون   52

 

3-10-  تجزیه وتحلیل آماری داده ها. 52

 

فصل چهارم: تجزیه و تحلیل داده‏ها

 

4-1- تهیه محیط کشت تازه و اطمینان از خالص بودن سویه نگهداری شده   54

 

4-2- پیش تست سویه مورد نظر برای اطمینان مجدد از انحلال فسفات   54

 

4-3- تاثیر مواد حامل بر بقاء سویه باکتری. 55

 

 

4-3-1 تاثیر تنش دمایی بر افزایش بقاء باکتری در فرمول   55

 

4-3-2 تاثیر تنش شوری بر افزایش بقاء باکتری در فرمول. 65

 

4-3-3 تاثیر تنش خشکی بر افزایش بقا باکتری در فرمول. 73

 

4-3-4 تاثیر تنش PH بر افزایش بقا باکتری در فرمول. 76

 

4-3-5 تاثیر تنش UV بر افزایش بقا باکتری در فرمول. 84

 

4-4- اعمال بهترین تیمار به گلدان و بررسی پایداری باکتری در ریزوسفر گیاه. 89

 

4-6- تاثیر سطوح مختلف تلقیح به کار برده شده در جذب فسفات توسط گیاه و نتایج آنالیز فسفات خاک گلدان‏ها و آنالیز فسفات گیاه   96

 

4-7- بررسی بقاء باکتری در حامل‏های مختلف. 103

 

فصل پنجم: نتیجه گیری و پیشنهادات

 

5-1- نتیجه گیری. 111

 

5-2- پیشنهادات. 119

 

منابع و مآخذ. 121

 

فهرست منابع فارسی. 121

 

فهرست منابع انگلیسی. 123

 

چکیده انگلیسی. 126

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

جدول 1-1- فهرستی از كودهای زیستی فسفاته داخل کشور.. 25

 

جدول 2-1- درجه حرارت های مورد نیاز گیاه تربچه.. 32

 

جدول 3-1- ترکیبات محیط کشت PVK.. 43

 

جدول 3-2- ترکیبات محیط کشت استارچ کازئین آگار.. 46

 

جدول 3-3- ترکیبات سرم فیزیولوژی.. 47

 

جدول 3-4-  ترکیبات محیط کشت نوترینت براث.. 51

 

جدول 3-5- نتایج آنالیز مینرالوژی و تجزیه سرندی خاک.. 52

 

جدول 3-6- توزیع اندازه ذرات خاک.. 52

 

جدول 4-1- میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف دمایی (درجه سانتیگراد).. 55

 

جدول 4-2- میانگین بقاء باکتری در زمان‏ (روز شمارش).. 55

 

جدول 4-3- میانگین بقاء باکتری در رقت‏های مختلف.. 55

 

جدول 4-4- تجزیه واریانس سطوح مختلف دما بر بقاء باکتری.. 56

 

جدول 4-5- تجزیه واریانس سطوح مختلف زمان شمارش کلنی‏ها بر بقاء باکتری.. 56

 

جدول 4-6- تجزیه واریانس سطوح مختلف رقت بر بقاء باکتری.. 56

 

جدول 4-7- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف دما به روش دانکن (α < 0.05).. 57

 

جدول 4-8- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف دما به روش دانکن (α <0.05).. 57

 

جدول 4-9- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف رقت به روش دانکن (α <0.05).. 57

 

جدول 4-10- میانگین بقاء باکتری بر اساس مواد حامل فرموله شده در تنش دمایی.. 58

 

جدول 4-11- تجزیه واریانس بین مواد حامل فرموله شده مختلف بر بقاء باکتری.. 58

 

جدول 4-12- مقایسه میانگین تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری به روش دانکن (α <0.05).. 59

 

جدول 4-13- میانگین بقاء باکتری بر اساس فاکتورهای دما، رقت، زمان شمارش کلنی‏ها و مواد حامل فرموله شده.. 60

 

جدول 4-14- میزان معنی داری فاکورهای دما (Temperature)، رقت (Dilution)، زمان شمارش کلنی‏ها (Day) و مواد حامل فرموله شده (Carrier Materials) بر بقاء باکتری در تنش دمایی.. 62

 

جدول 4-15- میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف شوری.. 65

 

جدول 4-16- میانگین بقاء باکتری در زمان‏ (روز شمارش).. 65

 

جدول 4-17- میانگین بقاء باکتری در رقت‏های مختلف.. 65

 

جدول 4-18- تجزیه واریانس سطوح مختلف شوری بر بقاء باکتری   66

 

جدول 4-19- تجزیه واریانس سطوح مختلف زمان شمارش کلنی‏ها بر بقاء باکتری.. 66

 

جدول 4-20- تجزیه واریانس سطوح مختلف رقت بر بقاء باکتری.. 66

 

جدول 4-21- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف شوری  به روش دانکن (α <0.05).. 66

 

جدول 4-22- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف زمان به روش دانکن (α <0.05).. 67

 

جدول 4-23- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف رقت به روش دانکن (α <0.05).. 67

 

جدول 4-24- میانگین بقاء باکتری بر اساس مواد حامل فرموله شده در تنش شوری.. 67

 

جدول 4-25- تجزیه واریانس بین مواد حامل فرموله شده مختلف بر بقاء باکتری تحت تنش شوری.. 68

 

جدول 4-26- مقایسه میانگین تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری به روش دانکن  در تنش شوری(<0.05).. 68

 

جدول 4-27- میانگین بقاء باکتری بر اساس فاکتورهای شوری، رقت، زمان شمارش کلنی‏ها و مواد حامل فرموله شده.. 69

 

جدول 4-28- میزان معنی داری فاکورهای شوری (Salinity)، رقت (Dilution)، زمان شمارش کلنی‏ها (Day) و مواد حامل فرموله شده (Carrier Materials) بر بقاء باکتری در تنش شوری.. 71

 

جدول 4-29- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف خشکی  و مواد حامل به روش دانکن (α <0.05) ……………………. 72

 

جدول 4-30- میانگین بقاء باکتری بر اساس مواد حامل فرموله شده در تنش خشکی…………………………………… 73

 

جدول 4-31- مقایسه میانگین تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری در تنش خشکی به روش دانکن       (α <0.05)……………….. 73

 

جدول 4-32- میانگین بقاء باکتری بر اساس فاکتورهای خشکی و مواد حامل فرموله شده…………………………….. 73

 

جدول 4-33- میزان معنی داری فاکورهای خشکی و مواد حامل فرموله شده (Carrier Materials) بر بقاء باکتری.. 75

 

جدول 4-34- تجزیه واریانس سطوح مختلف pH بر بقاء باکتری.. 76

 

جدول 4-35- تجزیه واریانس سطوح مختلف زمان شمارش کلنی‏ها بر بقاء باکتری.. 76

 

جدول 4-36- تجزیه واریانس سطوح مختلف رقت بر بقاء باکتری.. 77

 

جدول 4-37- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف pH  به روش دانکن (α <0.05).. 77

 

جدول 4-38- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف زمان به روش دانکن تحت تاثیر تنش pH (α <0.05).. 77

 

جدول 4-39- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف رقت به روش دانکن تحت تاثیر تنش pH(α <0.05).. 78

 

جدول 4-40- میانگین بقاء باکتری بر اساس مواد حامل فرموله شده تحت تاثیر تنش pH.. 78

 

جدول 4-41- تجزیه واریانس بین مواد حامل فرموله شده مختلف بر بقاء باکتری.. 78

 

جدول 4-42- مقایسه میانگین تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری به روش دانکن (α <0.05).. 79

 

جدول 4-43- میانگین بقاء باکتری بر اساس فاکتورهای pH ، رقت، زمان شمارش کلنی‏ها و مواد حامل فرموله شده.. 80

 

جدول 4-44- میزان معنی داری فاکورهای pH ، رقت (Dilution)، زمان شمارش کلنی‏ها (Day) و                                             مواد حامل فرموله شده (Carrier Materials) بر بقاء باکتری.. 82

 

جدول 4-45- تجزیه واریانس سطوح مختلف زمان شمارش کلنی‏ها بر بقاء باکتری در تنش uv. 84

 

جدول 4-46- تجزیه واریانس سطوح مختلف رقت بر بقاء باکتری در تنش uv  84

 

جدول 4-47- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف uv به روش دانکن (α <0.05).. 85

 

جدول 4-48- مقایسه میانگین بقاء باکتری در سطوح مختلف رقت به روش دانکن تحت تنش uv  (α <0.05).. 85

 

جدول 4-49- میانگین بقاء باکتری بر اساس مواد حامل فرموله شده تحت تنش uv. 86

 

جدول 4-50- تجزیه واریانس بین مواد حامل فرموله شده مختلف بر بقاء باکتری تحت تنش uv. 86

 

جدول 4-51- مقایسه میانگین تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری به روش دانکن تحت تنش uv        (α <0.05).. 86

 

جدول 4-52- میانگین بقاء باکتری بر اساس فاکتورهای uv، رقت، زمان شمارش کلنی‏ها و مواد حامل فرموله شده.. 87

 

جدول 4-53- میزان معنی داری فاکورهای uv، رقت (Dilution)، زمان شمارش کلنی‏ها (min) و                                             مواد حامل فرموله شده (Carrier Materials) بر بقاء باکتری.. 88

 

جدول 4-54- میانگین بقاء باکتری در ریزوسفر گیاه تربچه بر اساس مواد حامل فرموله شده.. 90

 

جدول 4-55- تجزیه واریانس بین مواد حامل فرموله شده مختلف بر بقاء باکتری در ریزوسفر گیاه تربچه.. 90

 

جدول 4-56- مقایسه میانگین بقاء باکتری در ریزوسفر گیاه تربچه به روش دانکن (α <0.05).. 91

 

جدول 4-57- میانگین بقاء باکتری در مواد حامل مختلف تلقیح شده به بذر.. 92

 

جدول 4-58- میانگین بقاء باکتری در زمان‏ (روز شمارش).. 92

 

جدول 4-59- مقایسه میانگین تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری به روش دانکن (α <0.05).. 93

 

جدول 4-60- مقایسه میانگین بقاء باکتری در حامل های مختلف به روش دانکن (α <0.05).. 93

 

جدول 4-61- میانگین بقاء باکتری در مواد حامل فرموله شده و زمان شمارش کلنی‏ها.. 94

 

جدول 4-62- میزان معنی داری فاکورهای زمان شمارش کلنی‏ها (Day) و مواد حامل فرموله شده (Carrier Materials) بر بقاء باکتری.. 94

 

جدول 4-63- میزان معنی داری فاکورهای طول برگ (Leaf Lenght)، وزن خشک (Dry Weight) ،  وزن تر (Fersh Weight) ، فسفات خاک (Soil Phosphate) و فسفات گیاه (Plant Phosphate)بر بقاء باکتری.. 96

 

جدول 4-64- مقایسه میانگین طول برگ در حامل های مختلف به روش دانکن (α <0.05).. 97

 

جدول 4-65- مقایسه میانگین وزن خشک در حامل های مختلف به روش دانکن (α <0.05).. 97

 

جدول 4-66- مقایسه میانگین وزن تر در حامل های مختلف به روش دانکن (α <0.05).. 98

 

جدول 4-67- مقایسه میانگین فسفات خاک در حامل های مختلف به روش دانکن (α <0.05). 98

 

جدول 4-68- مقایسه میانگین فسفات گیاه در حامل های مختلف به روش دانکن (α <0.05).. 99

 

جدول 4-69- میانگین بقاء باکتری در زمان‏ (روز شمارش) در دوره 3 ماهه.. 103

 

جدول 4-70- میانگین بقاء باکتری در رقت‏های مختلف در دوره 3 ماهه   103

 

جدول 4-71- تجزیه واریانس سطوح مختلف زمان شمارش کلنی‏ها بر بقاء باکتری در دوره 3 ماهه.. 104

 

جدول 4-72- تجزیه واریانس سطوح مختلف رقت بر بقاء باکتری در دوره 3 ماهه.. 104

 

جدول 4-73- مقایسه میانگین بقاء باکتری در حامل‏های مختلف در زمان های شمارش مختلف به روش دانکن (α <0.05).. 104

 

جدول 4-74- مقایسه میانگین رقت بر بقاء باکتری به روش دانکن  در دوره 3 ماهه (α <0.05).. 105

 

جدول 4-75- میانگین بقاء باکتری بر اساس مواد حامل فرموله شده در دوره 3 ماهه.. 105

 

جدول 4-77- مقایسه میانگین تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری به روش دانکن (α <0.05).. 106

 

جدول 4-78- میانگین بقاء باکتری در مواد حامل فرموله شده، رقت و زمان شمارش کلنی‏ها.. 107

 

جدول 4-79- میزان معنی داری فاکورهای رقت (Dilution)، زمان شمارش کلنی‏ها (Day) و مواد حامل فرموله شده (Carrier Materials) بر بقاء باکتری   108

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست نمودارها

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

نمودار 3-1- منحنی استاندارد فسفر(گیاه).. 50

 

نمودار 4-1- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور زمان شمارش کلنی‏ها (روز).. 63

 

نمودار 4-2- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور دما (درجه سانتیگراد).. 63

 

نمودار 4-3- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور رقت   64

 

نمودار 4-4- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور شوری (درصد).. 72

 

نمودار 4-5- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور زمان شمارش کلنی‏ها (روز) تحت تنش شوری.. 72

 

نمودار 4-6- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور رقت تحت تنش شوری.. 73

 

نمودار 4-7- تاثیر سطوح مختلف خشکی و ماده حامل بر بقاء باکتری در فرمول.. 76

 

نمودار 4-8- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور pH   83

 

نمودار4 -9- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور زمان شمارش کلنی‏ها (روز) تحت تنش pH.. 83

 

نمودار 4-10- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور رقت تحت تنش pH.. 84

 

نمودار 4-11- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور زمان شمارش کلنی‏ها (دقیقه) تحت تنش uv. 88

 

نمودار 4-12- تاثیر مواد حامل بر بقاء باکتری بر اساس فاکتور رقت تحت تنش uv. 89

 

نمودار 4-14- بقا باکتری در سطوح مختلف تلقیح.. 95

 

نمودار 4-15- اندازه طول برگ در تیمارها.. 99

 

نمودار 4-16- وزن خشک گیاه در تیمارها.. 100

 

نمودار 4-17- وزن تر گیاه در تیمارها.. 100

 

نمودار 4-18- آنالیز فسفات خاک گلدان ها در تیمارها.. 101

 

نمودار 4-19- آنالیز فسفات گیاه در تیمارها.. 101

 

نمودار 4-21- بقا باکتری در حامل‏ و رقت‏های مختلف در مدت 90 روز   108

 

نمودار 4-22- بقا باکتری در حامل‏های مختلف در مدت 90 روز.. 109

 

نمودار 4-23- بقا باکتری درمدت زمان 90 روز‏ و رقت‏های مختلف   109

 

 

 

 

 

فهرست شکل ها  

 

عنوان                                                  شماره صفحه

 

شکل 1-1- تغییر و تبدیلات فسفر خاک توسط باکتری ها. 11

 

شکل 1-2- مکانیسم های انحلال فسفات توسط باکتری. 14

 

شکل 1-3- تاثیر باکتری های حل کننده فسفات روی گیاهان. 16

 

شکل 1-4- لیگنیت. 30

 

شکل 1-5- گیاه تربچه. 31

 

شکل 1-6- تربچه نقلی یا چهار فصل. 34

 

شکل 3-1- تیمارهای فرموله شده از لیگنیت، سویا، خاک فسفات   44

 

شکل 4-1- کشت تازه از سویه روی محیط pvk. 54

 

شکل 4-2-کشت روی محیط pvk. 54

 

شکل 4-3- مقایسه ظاهری تیمار فرمول با کنترل. 90

 

شکل 4-4- تیمارهای بکارگرفته شده در گلدان ها در هفته اول و دوم   102

 

شکل 4-5- مقایسه ظاهری تیمارها با کنترل. 102

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

چکیده

 

مصرف بی رویه کودهای شیمیایی موجب عدم تعادل عناصر و مواد غذایی موجود در خاک، کاهش بازده محصولات کشاورزی و به خطر افتادن سلامت انسان­ها و دیگر موجودات زنده شده است. به همین علت امروزه استفاده از کودهای زیستی مورد توجه قرار گرفته است. باکتری­های حل کننده فسفات برای افزایش فراهمی فسفر مورد نیاز گیاه کارآمد به نظر می رسند. با توجه به اینکه اغلب خاک های ایران آهکی بوده و در اقلیم‏های خشک و نیمه خشک هستند، وجود pH بالا، درصد زیاد کربنات کلسیم، کمبود مواد آلی و خشکی خاک باعث شده اند که جذب فسفر کمتر از مقدار لازم برای تامین رشد بهینه اغلب محصولات کشاورزی باشد، لذا هدف از این پژوهش بررسی تاثیر spp.  Streptomyces جدا شده از خاک بر انحلال فسفات به منظور تولید کود زیستی فسفاته می باشد. جهت حداکثر افزایش بقاء باکتری در ماده حامل از سطوح تلقیح مختلفی که شامل لیگنیت و مواد تکمیلی پودر سویا و خاک فسفاته با نسبتهای مشخص بود استفاده شد و این مواد حامل تلقیح شده تحت تنشهای دما، شوری، خشکی، pH و uv قرار گرفتند همچنین کلیه مواد حامل ساخته و تلقیح شده بطور جداگانه در یک بازه زمانی 90 روز از لحاظ بررسی بقاء باکتری سنجیده شدند. بهترین فرمول به دست آمده از تنشها در گلدان به کارگیری شد. همچنین تیمارهای دیگری نیز از لیگنیت با سطوح مختلف ساخته و با باکتری و بذر تربچه تلقیح شد و بقاء باکتری در بازه 24 ساعته اندازه گیری شد و بعد از آن در گلدان به کار گرفته شدند. با توجه به نتایج به دست آمده بهترین فرمول به دست آمده از تنش­ها و بازه زمانی 90 روز، فرمول لیگنیت + خاک فسفات 2% + سویا 1% تعیین شد و بعد از بکارگیری در گلدان بهترین نتیجه را نسبت به سایر مواد حامل و کنترل نشان داد و پارامترهای رشد گیاه تربچه و جذب فسفات گیاه را بهتر از تمامی مواد حامل و کنترل افزایش داده است. از بین تیمارهای ساخته شده و تلقیح شده به بذر تیمار شامل 200 گرم حامل + خاک مزرعه بهترین نتایج را نشان داد و بعد از به کارگیری تیمارها در گلدان نیز تیمار شامل 200 گرم حامل + خاک مزرعه بهترین نتیجه را نشان داد. این فرمول بهترین نتیجه را در پارامترهای رشد گیاه تربچه و جذب فسفات گیاه نسبت به سایر تیمارها نشان داد. در یک نتیجه گیری کلی، فرمول لیگنیت + خاک فسفات 2% + سویا 1% به عنوان فرمول نهایی و اصلی برای به کارگیری در آزمایشات بعدی و مقیاس مزرعه پیشنهاد می‏گردد.